西番莲叶有效成分及其非酶糖基化作用的研究

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果西番莲叶有效成分及其非酶糖基化作用的研究作者：刘红，张彩平，鲁团伟，李丽，何文英，贾桂云，张连华【摘要】目的研究西番莲叶有效成分抑制其非酶糖基化作用。方法运用GF254薄层层析，HPLC等对西番莲叶石油醚部位进行提取分离。结果石油醚部位的主要黄酮物质为芸香苷。结论芸香苷为西番莲叶石油醚部位抑制蛋白质非酶糖基化作用的主要成分。【关键词】西番莲；芸香苷；非酶糖基化；高效液相色谱；气相色谱-质谱联用

2、西番莲是西番莲科(Passifloraceae)西番莲属的多年生常绿藤本植物。西番莲果大，可鲜食，其汁蛋黄色，尤其突出的是，其果汁所含的六十多种酯类等香味成分使其具有强烈诱人的风味和香气，被誉为“百香果”［1］。　　祖国医学在治疗糖尿病及其并发症方面有悠久的历史，如何从中草药中寻找抑制蛋白质糖基化的有效成分是一项非常有价值的工作，目前这方面的研究还不多。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课

3、题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果　　蛋白质非酶糖基化在糖尿病血管并发症的发生中占有重要地位。蛋白质与羰基化合物(葡萄糖、果糖和乙二醛等)发生非酶糖基化反应，最终可形成一系列不可逆的糖基化终产物AGEs。AGEs可与蛋白质发生交联，改变蛋白质的生理活性，引起一系列病理生理改变。此外，AGEs与动脉粥样硬化的发生发展密切相关［2］。因此，如何抑制蛋白质的非酶糖基化是近年来国内外研究的热点。目前国外已证实，氨基胍,二甲双胍可抑制蛋白质的糖基化，并相继开发出一系列药物［3］。　　本文通过对西番

4、莲叶用95%乙醇浸泡d［4］，用石油醚萃取分离，对乙醇和石油醚部分薄层分析、HPLC分析，并对提取物进行了抑制糖基化作用的研究。1仪器与材料仪器高效液相色谱；DHG-9246A型电热恒温鼓风干燥箱；FW-117中草药粉碎机；旋转蒸发仪。试剂乙醇，醋酸乙酯，石油醚，正丁醇,乙二醛，磷酸二氢钠，磷酸氢二钠，葡萄糖，D-果糖，叠氮化钠，牛血清白蛋白，盐酸二甲双胍，芸香苷。　　　方法.1课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有

5、一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果提取与分离西番莲叶样品于XX-10晴天上午10时采自海南屯昌南坤，在65℃经干燥箱干燥d，后经粉碎制得。西番莲叶粉碎后,用95%的乙醇浸泡d，然后用石油醚浸泡萃取，抽真空过滤，旋转蒸发仪分离得到浸膏，用石油醚-醋酸乙酯做展开剂，进行薄层色谱，得到两层，将第1层Rf=用石油醚溶解，备用。.2鉴定HPLC的色谱条件：用2%的乙酸溶液和乙腈做流动相，天津天和C18柱，250mm×，波长3nm,灵敏度,柱温30℃，流速/min，进样量2

6、0μl［5］。芸香苷和石油醚部位的薄层分析提取物的HPLC的色谱见图1～2。通过对上面HPLC谱图分析可知，芸香苷对照品的主峰出峰时间与西番莲石油醚部位的主峰出峰时间相同，可以得出石油醚部位通过薄层色谱分离得到了芸香苷。非酶糖基化.西番莲提取物的制备文献报道了芸香苷和西番莲具有抑制糖基化作用［6］，但是石油醚部位抑制蛋白质非酶糖基化作用的研究还未见报道。所以主要对石油醚部位进行了非酶糖基化研究。　　称取西番莲粉g，用150ml5%的乙醇浸泡d，重复3次，减压抽滤用下面的滤液到旋转蒸发仪蒸发得到浸膏，用水溶解所得浸膏，依次用1

7、2，9，ml的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇各萃取3次，将所得的不同提取层的溶液置于60℃干燥，得到各提取层所得的石油醚、醋酸乙酯、正丁醇、水层提取物质量，每一层各取10mg用无水乙醇溶解定容到50ml备用。课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果.溶液配制pH=磷酸盐缓冲液的配制［7］：精密称取溶解至100ml,溶解至30ml

8、，配制成了/L的Na2HPO100ml和/L的NaH2PO40ml，然后按81∶19配制成/l的磷酸盐缓冲液100ml。.蛋白质非酶糖基化反应根据文献，反应液由1mg/ml乙二醛，10mg/ml牛血清白蛋白和mg/ml叠氮化钠在，/L的磷酸缓冲液，ml反应液与ml水混合，于37℃恒温水浴箱