4虎纹捕鸟蛛毒素ⅰ用pet31b载体的表达和纯化

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1、!""#$%%&’&()(中国生物化学与分子生物学报)%%+年C月*#$$’+,&%-.*/0123245671895:;057?81@A592<6987;0595B?$（D)）：$DEF)%%"""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""重组虎纹捕鸟蛛毒素!用!"#$%&载体的表达和纯化刁建波$），刘君梁)），梁宋平)）!（$）北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室，北京$%%,&$；)）湖南师范大学生命科学学院，长沙C$%%,$）摘要化

2、学全合成虎纹捕鸟蛛毒素’!（GHIJ’!）基因在大肠杆菌中被表达，采用KLI+$M载体，表达产物#端为大肠杆菌酮基立体异构酶的融合蛋白，经亲和连续(个组氨酸的亲和柱层析后，溴化氰切割融合蛋白，再经高效液相色谱反相柱纯化，得到了重组虎纹捕鸟蛛毒素!N质谱分析及#端测序表明，7GHIJ’!系正确表达产物N还原复性的7GHIJ’!表现出与天然GHIJ’!一致的生物学活性N关键词虎纹捕鸟蛛毒素!，KLI+$M，表达与纯化，溴化氰，变复性中图分类号.D((，.&,"’!()**+,-,./)0,1&+-2-345#67!8)-)&9!"#$%&:)0

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6、67281@7218>678>051虎纹捕鸟蛛是$DD)年于广西宁明发现的捕鸟捕鸟蛛分布范围窄小，通过这种方法获得的毒素量蛛新种，其毒液中多种成分已相继被分离纯化，并开有限，因而仅靠天然资源远不能满足对毒素的全面展了结构与功能研究［$，)］研究和开发利用的需要N采用蛋白质固相合成的方N其中的虎纹捕鸟蛛毒素’法也可以得到GHIJ’!这种肽类毒素［E］，但每次合!（GHIJ’!）由++个氨基酸组成，含+对二硫键，其空间立体结构已由.6等采用二维核磁共振的方成量有限，并且试剂昂贵，成本很高N因此，需要寻找法得以阐明［+］，显示其为典型的抑制剂胱氨

7、酸结更为经济实用的方法以便大量地获得这种毒素N基（!*_）模体，+对二硫键配合三股反向平行的折叠"形成一个非常致密稳定的结构，是进行蛋白质工程收稿日期：)%%)’%&’%C，接受日期：)%%)’%,’)(改造的良好分子构架N功能分析表明，GHIJ’!为突国家自然科学基金资助项目（#5N+DDD%(%%）触前膜#型钙离子通道的阻断剂［C］，因而是一种研!联系人：I29：%&+$’,,&)EE(，L’=809：9081B3KK6M90

8、初步显示，GHIJ’!具有明显的镇痛活性，并可]2<20X2@：469?C，)%%)；P<<2K>2@：P6B63>)(，)%%)能被开发成一种新型药物N因此，大量获得GHIJ’