两种新型虎纹捕鸟蛛毒素结构和功能的研究

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1、缩写表(中英文对照)ACN乙腈(aeetonitrile)AP过硫酸铵(ammoniumpersulphale)CCAcc．氟基-4一羟基肉桂酸(c【．cyano．4．hydroxy-cinnamicacid)‘DTT二硫苏糖醇(dithiothreit01)HWTX．I虎纹毒素。I(huwentoxin—I)HWTX．II虎纹毒素一11(huwentoxin，11)HWTX-1H虎纹毒素．11I(huwentoxin．1II)IAA碘乙酰胺(iodoacetamide)MALDI．TOFMS基质辅助激光解吸飞行时间质谱(Matrix．assistedlaser-

2、SDSSIIL．ITFAPITCDDHzOEDTAHPLCDMFTrisdesorption／ionizationtime-of-flightmassspectrometry)十二烷基硫酸钠(sodiumdodecylsulfate)虎纹捕鸟蛛凝集素．I(selenocosmiahuwenalectin-I)三氟乙酸(trifluoroaceticacid)异硫氯酸苯酯(phenylisothiocyanate)双蒸水(doubledistilledwater)乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacidediticacid)高效液相

3、色谱(highperformanceliquidphasechromat-ography)N，N·二甲基甲酰胺(Form-dimethylamide)三羟甲基氨基甲烷【tris(hydroxymethyl)aminomethane]中文摘要蜘蛛毒液中发现有丰富的肽类神经毒素：至今已有近百种蜘蛛神经毒素的一级结构被测定，除黑寡妇蜘蛛毒素为高分子量毒素外，其他蜘蛛神经毒素的分子量在3-12KD之间，不同种属来源的毒素同源性很小，序列中含有较多的半胱氨酸。这些毒素功能多样，可与细胞膜上的Na+、K+或ca2+等离子通道相互作用。由于它们对离子通道的选择性，这些毒素在神经

4、生物学和药理学研究上已得到了广泛的应用。虎纹捕鸟蛛(Selenocosmiahuwena)是我国西南部山区发现的蜘蛛新种，属于捕鸟蛛科(Theraphosidae上该蛛穴居地下，个体大，毒性强。粗毒中含有多种酶类及使小鼠致死的活性成分。应用离子交换色谱及反相色谱从该粗毒中已分离到五种神经毒素Huwentoxin．I(HWTX．I)、Huwentoxin．II(HWTX—II)、Huwentoxin—Ill(HWTX．Ili)、Huwentoxin．IV(HWTX．IV)、Huwentoxin—V(HWTX—V)及一种凝集素活性肽SLH-I和透明质酸酶。本文报道从虎

5、纹捕鸟蛛(Selenocosmiahuwena)毒液中纯化的一种新型肽类神经毒素，命名为虎纹捕鸟蛛毒素一vI(HuWentoxin．V1，HWTX—VI)的生物学性质及基本生物学功能结果。该毒素由40个氨基酸残基组成，分子中含6个半胱氨酸残基，并形成三对二硫键，分子量为4440．18Da。其一级结构已测定为：NH2．CIGEGVPCDENDPRCCSGLVVLKKTLHGIWIKSSyCYKCK．COOH．该毒素经搜索SWISS．PROT蛋白质序列库，发现HWTX—VI的氨基酸序列与其它蜘蛛毒素的同源性较小。脑内注射实验表明该毒素对小鼠神经系统有可·恢复性的致瘫作

6、用。此外从虎纹捕鸟蛛(Selenocosmiahuwena)毒液中纯化的另一种新型肽类神经毒素，虎纹捕鸟蛛毒素．VII(Huwentoxin．VII，HWTX-VII)的化学性质与基本生物学功能。该毒素由34个氨基酸残基组成，分子中含6个半胱氨酸残基，形成三对二硫键，分子量为3137．22Da。其一级结构为：NH2．IICAPEGGPCVAGIGCCAGLRCSGAKLGLAGSCQ-COOH。脑内注射实验表明该毒素对小鼠神经系统有致瘫作用。关键词：蜘蛛毒素、Huwentoxin．VI、Huwentoxin．ⅥI、一级结构、SelenocosmiahuwenaAB

7、STRACTSDidervenomscontainavarietyofneurotoxicpeptidecomponents．Theaminoacidsequencesofabout100kindsofspidertoxinhavebeendeterminedSOfar．Theirmolecularweightswerevariedfrom3to12KDexceptforblackwidowspidertoxins，whichwerehighmolecularmasstypes．"lherewereplentyofcysteineresiduesintheirse

8、quenc