《转免疫学实验》word版

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1、转免疫学实验课件转免疫学实验课件免疫学实验课件生化与免疫学实验室中性粒细胞的吞噬作用【实验目的】1.熟悉中性粒细胞吞噬实验的原理和方法。2.通过本实验理解机体的非特异性免疫机制。【实验原理】中性粒细胞具有吞噬杀菌功能，当与颗粒性物质(如葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒性物质被吞噬杀灭，根据吞噬率、吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。【实验材料】1.表皮(白色)葡萄球菌菌液(浓度6~10亿/ml)。2.肝素溶液(25U/ml)；甲醇，碱性美蓝(或瑞氏)染液。3.血红蛋白吸管，凹玻片，载玻片，采血针，微量加样器，湿盒，显

2、微镜，恒温培养箱，75%酒精，棉签，香柏油，二甲苯等。【实验方法】1、用微量加样器，吸取肝素20ul加入洁净凹玻片凹孔内。2、用酒精棉签消毒手指后，刺破皮肤，以血红蛋白吸管取血40ul，立即放入盛有肝素的凹玻片凹孔内，并充分混匀。3、用微量加样器取葡萄球菌菌液20ul加入上述凹玻片凹孔内，充分混匀。4、将凹玻片置于湿盒内，30℃温箱中30min，其间每隔10min摇匀一次。5、取一小滴上述混合液，置于载玻片上，用另一载玻片推成薄血片，待干。6、滴加甲醇固定3min，水洗。7、加碱性美蓝染色1~2min，水洗，印干。8

3、、置油镜下观察吞噬和未吞噬的白细胞并计数。【实验结果】【实验思考】1、在吞噬细胞中发现细菌时，如何区别吞噬的细菌和粘附在吞噬细胞表面的细菌?2、简述机体非特异性免疫的概念及特点。凝集反应【实验目的】1.了解凝集反应的原理、基本类型及其临床意义。2.掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的实验方法和结果分析。【概述】在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。凝集反应是一种定性的检测方法，也可以进行半定量检测。凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝集反应。由于凝集反应方法简便，目前在临

4、床检验中仍被广泛应用。一、直接凝集反应细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。玻片凝集试验--ABO血型鉴定玻片凝集试验为定性试验，一般用已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。此法简便，快速，适用于从病人标本中分离得到的菌种的诊断或分型，也可用于红细胞ABO血型的鉴定。【实验原理】人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根据红细胞表面这两种抗

5、原的有无可把血型分为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测红细胞混合，抗A或(和)抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，据其凝集情况便可判定出受试者的血型。ABO血型的划分【实验材料】1.ABO血型鉴定试剂盒内含抗A分型试剂和抗B分型试剂各1支。2.一次性采血针1枚、洁净玻片2块、75%酒精、灭菌棉签。3.84消毒液3.用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片一端取适量血液加入抗抗A分型试剂，并混匀；用另一端再取适量血液加入抗抗B分型试剂，并混匀。用干棉签止血

6、。4.观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判定结果后把玻片放入消毒液中。二、间接凝集反应将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面(这种载体与免疫无关)，然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。根据载体的不同可将间接凝集反应分为：间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验(及间接乳胶凝集抑制试验)和金黄色葡萄球菌协同凝集试验等。间接凝集抑制试验--妊娠试验【实验原理】可溶性抗原致敏的乳胶颗粒与相应抗体作用可使乳胶颗粒凝集，此为

7、间接乳胶凝集试验。若使抗体先与可溶性抗原作用，再加入该抗原致敏的乳胶颗粒，则乳胶凝集被抑制，此为间接乳胶凝集抑制试验。孕妇尿中绒毛膜促性腺激素(HCG)含量明显增高。HCG与抗HCG抗体先作用后，再加入HCG致敏的乳胶颗粒，不出现凝集反应，此为妊娠试验阳性；非孕妇尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗体，抗体与后加入的HCG致敏乳胶结合呈现凝集现象，则妊娠试验阴性。【实验材料】1.妊娠诊断试剂盒：内含抗血清(抗HCG)、乳胶抗原(HCG致敏)各一支2.待检尿、孕妇尿、正常尿。3.有格玻片和毛细吸管等。【实验方法】1.在

8、玻片的第1、第2和第3格内分别加1滴正常尿、待检尿及孕妇尿。2.每格内加入妊娠诊断试剂抗血清1滴。轻轻摇动1~2min使其充分混匀。3.每格加入乳胶抗原1滴，轻轻摇动玻片3~5min后观察结果，记录各标本有无凝集现象。【实验结果】孕妇尿格呈均匀浑浊乳状液，无凝集，妊娠试验阳性；正常尿格出现白色细小凝集物，随时间延长凝集物变成小块状，妊娠试验阴性