细菌芽孢染色报告

《细菌芽孢染色报告》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划细菌芽孢染色报告　　细菌芽孢染色　　姓名：徐一鸣学号：XX　　地址：周三下午微生物实验楼341第六排　　摘要：通过Schaeffer-Fulton氏染色法对枯草芽孢杆菌和梭状芽孢杆菌进行芽孢染色，在光学显微镜下观察其菌体形态和芽孢的大小，数量，位置，得到清晰的染色结果。　　关键词：芽孢；细菌；Schaeffer-Fulton氏染色法　　前言：细菌的芽孢的某些细菌的特殊结构。芽孢是某些细菌生长到一定阶段在体内形成的一个圆形或椭圆形的休眠体，它对不良环境具有很强的抗性。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。芽孢的大小、形状及其在菌体内的位置是鉴定细菌的重要依据。在一般实验室中通常用芽孢染色法来观察其形态。此外，由于芽孢具有很强的抗性，因此在生产实践中都以是否有杀死抗性最强的芽孢来评定高温灭菌及某些化学杀菌剂的效果。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于一个原则：除了用着色强的染料外，还须要加热，以促进芽孢着色，再使菌体脱色，而芽孢上的染料则难以渗出，故仍保留原有的颜色，然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。　　1.材料与方法　　材料　　菌种　　枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌　　染色剂和试剂　　5%孔雀绿水溶液，香柏油，番红水溶液　　仪器及其他　　载玻片，擦镜纸，吸水纸，记号笔，镊子，接种环，显微镜，酒精灯，夹子　　方法　　制片　　按常规方法涂片、干燥、固定。　　加热染色　　向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌位置，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸气并维持5min，加热时注意补充染液，切勿涂片干固。　　脱色　　待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色为止。　　复染目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　用%的番红水溶液复染2min。　　水洗　　用自来水冲洗至流出水无色为止。　　镜检　　将载玻片晾干后油镜检。　　2结果与分析　　实验结果　　1）观察分别接种有枯草芽孢杆菌和梭装芽孢杆菌的菌落形态，枯草杆菌菌落大，表面粗糙，扁平，不规则，梭装芽孢杆菌菌落扁平，不规则。　　2）镜检观察，芽孢呈绿色，芽孢囊为红色。枯草芽孢杆菌菌体形态为短杆状，末端钝圆，单生或形成短链，芽孢椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，含芽孢菌体不膨大。梭装芽孢杆菌芽孢呈圆形或卵圆形，直径大于菌体，位于菌体中央，极端或次极端，使菌体膨大呈梭状。　　分析　　在观察梭装芽孢杆菌芽孢时，发现有些部位孔雀绿水溶液染色过深，导致水洗时无法完全洗去，影响观察。以后实验中应注意孔雀绿水溶液加入的量，及加热时间，防止染色过深。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　实验时应注意一下以下几点：选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂；加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色；脱色必须等待玻片冷却厚进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。　　3.小结　　本次试验用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，效果清晰，较为显著，只是在观察梭装芽孢杆菌芽孢时，发现有些部位孔雀绿水溶液染色过深，导致水洗时无法完全洗去，菌体也被染色，影响观察。以后实验中应注意孔雀绿水溶液加入的量，及加热时间，防止染色过深，影响观察。　　参考文献　　沈萍陈向东，《微生物学实验》，第79页，高等教育出版社　　王桂平，李财新，优化的细菌芽孢染色技术，微生物学杂志　　姓名班级13级生命基地班学号科目微生物学实验题目细菌芽胞染色组别3　　【实验题目】　　细菌芽孢染色　　【实验目的】　　1.学习并掌握芽孢染色法　　2.了解芽孢的形态特征目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　【实验器材】　　1、菌种：　　枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物、梭状芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。　　2、溶液和试剂：　　a)5％孔雀绿水溶液、%番红水溶液、无菌水　　b)香柏油、二甲苯　　3、仪器及其它用品：　　普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶、试管夹等　　【实验原理】　　芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。是否产生芽孢，以及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚而致密，通透性低，不易着色，但是，芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时，菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍保留。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。　　【实验内容及步骤】　　2、具体步骤：　　1)洗片、干燥　　取一块载玻片，用水浸湿，用手使用去污粉洗净玻片，竖立在一边自然干燥。干燥后在玻片的一面用记号笔做好标记。方便以后水洗染料，避免洗去细菌。　　2)涂片　　取一块载玻片，在上边用胶头滴管加半滴无菌水，用接种环无菌操作将沾有菌的接种环置于载玻片上的无菌水种涂抹，待看到微弱的浑浊即可；　　3)加热固定　　姓名班级13级生命基地班学号科目微生物学实验题目细菌芽胞染色组别3　　涂菌面朝上，通过火焰以干燥并固定菌物，固定过程应使载玻片通过火焰2-3次，注意温度的控制，过热的温度会将细菌杀死，温度以手背感觉微微发烫为标准；　　4)染色　　向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌位置，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸气并维持5min，加热时注意补充染液，切勿涂片干涸。　　5)脱色目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水为无色。　　6)复染　　用%的番红水溶液复染2min。　　7)水洗　　用缓流自来水冲洗至流出水为无色。　　8)干燥镜检　　将制备好的样片置于显微镜下进行观察，先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油，用油镜观察细菌的形态。　　【结果分析】　　1、染色结果　　镜检观察，芽孢呈绿色，菌体为红色。枯草芽孢杆菌菌体形态为短杆状，末端钝圆，单生或形成短链，芽孢呈椭圆状，位于菌体中央或稍偏，含芽孢菌体不膨大。　　梭装芽孢杆菌芽孢呈圆形或卵圆形，直径大于菌体，位于菌体中央或极端，使菌体膨大呈梭状。　　芽孢染色结果　　姓名班级13级生命基地班学号科目微生物学实验题目细菌芽胞染色组别3　　图1：枯草芽孢杆菌　　图2：梭状芽胞杆菌目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　姓名班级13级生命基地班学号科目微生物学实验题目细菌芽胞染色组别3　　2、实验结果分析　　在观察枯草芽孢杆菌芽孢时，发现有些部位孔雀绿水溶液染色较浅，影响观察。以后实验中应注意孔雀绿水溶液加入的量，及加热时间，防止染色程度不够，同时也应避免染色程度过深，多余染液不易完全洗去,影响观察。　　在今后的芽孢染色实验中应注意以下几点：　　1、选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已经破裂；　　2、加热染色时必须维持在染液冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破　　裂　　3、加热染色时控制好时间，加热不够则芽孢难以着色；时间过长会使染色过深，不易洗脱　　4、脱色时必须等待玻片冷却以后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。　　【思考与讨论】　　1、为什么芽孢染色需要进行加热？能否用简单染色法观察到细菌芽胞？　　细菌的芽孢壁较厚,对染料的通透性差,不易着色，在加热的过程中，芽孢的渗透性会发生变化，染液能顺利渗透进入芽孢，使染色效果更佳，所以芽孢染色需要加热。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　不能用简单染色法进行芽孢染色。因为简单染色法没办法给芽孢着色，芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难。　　2、若在你的制片中仅看到游离芽孢，而很少看到芽孢囊和营养细胞，试分析原因。　　A)可能该细菌培养时间过长，已到达生长的中后期，随着环境中营养物质的消耗，以及细菌代谢产物的积累，使得环境越来越不利于生长，因此产生大量的芽孢以度过不良环境。　　B)可能是在用孔雀绿染色后，水洗时没有洗净，细胞还是孔雀绿的颜色。　　C)可能是在用番红水复染时，染色时间过短，没有染色成功。　　3、用孔雀绿初染芽孢后，为什么必须等玻片冷却后再用水冲洗？　　脱色必须等玻片冷却后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。　　姓名：学号：　　班级：12级生物基地4组别：周三第六大组时间：　　细菌芽孢染色　　一．实验目的　　1.学习掌握芽孢染色法，了解芽孢的形态特征。2.巩固显微操作技术及无菌操作技术。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　二．实验原理　　细菌芽孢染色的基本原理：芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常呈圆形或椭圆形。细菌能否形成芽孢及芽孢的形状，着生位置、芽孢囊是否膨大等特征都是鉴定细菌的重要指标。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚、透性低而不易着色，但是芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力较强的染料，如孔雀绿，在加热条件下进行染色时，此染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样就可以将两者区别开来。在不同细菌中，芽孢所处的位置不同，有的在中部，有的在偏端，有的在顶端。芽孢一般呈圆形、椭圆形、圆柱形。常见的细菌芽孢形态和着生位置如下图所示：　　三．实验器材　　1、菌种：枯草芽孢杆菌，梭状芽孢杆菌，牛肉膏培养基。　　2、溶液和试剂：a)5%孔雀绿水溶液，%番红水溶液，95%乙醇，蒸馏水等。b)香柏油、二甲苯。　　3、仪器及其它用品：普通光学显微镜、电子天平、擦镜纸、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、锥形瓶等。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　四．操作步骤1.实验流程图：　　涂片→加热干燥固定→孔雀绿覆盖→微热5min→冷却→水洗→番红复染→　　水洗干燥→镜检　　2.详细步骤：　　a)涂片，加热干燥及固定：在洁净盖玻片接近中部两处分别滴一滴无菌水，分别接种枯草　　芽孢杆菌及梭状芽孢杆菌。然后按照常规方法加热干燥及固定；　　b)孔雀绿加热染色：用木夹夹住载玻片，向载玻片上滴加5%孔雀绿水溶液使之完全覆盖涂菌部位，然后在酒精灯上微微加热至染液冒蒸汽开始计时并维持5min，注意加热时应以有蒸汽微微冒出为宜，过热或加热不足均会影响观察效果，且加热时在载玻片上随时补加染液，切勿让涂片干涸；　　c)水洗：水洗一定要等载玻片冷却后进行，否则可能导致载玻片的破裂。具体水洗按常规方法进行；　　d)复染：用%番红水溶液复染2min；　　e)水洗并干燥：按常规方法水洗后自然干燥；　　f)镜检：先在低倍镜下寻找视野范围，然后换用高倍镜调焦，最后加香柏油在油镜下仔细寻找两种细菌以及其周围或内部染成绿色的芽孢。　　五．实验结果及分析目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　1.染色结果照片展示：　　图1枯草芽孢杆菌芽孢图示(10×100)　　图2梭状芽孢杆菌芽孢图示(10×100)　　2.　　3.结果分析：　　1）本次实验中，枯草芽孢杆菌的染色效果较好，红色的菌体和绿色的芽孢对比鲜明，　　但是视野中菌体数量较多，原因可能是用接种环刮取了过多的菌体到载玻片上。2）梭状芽孢杆菌的芽孢染色效果较好，但是菌体染色太淡，呈透明状，原因可能是用　　番红染液复染的时间较短，或者是复染后水洗时间过长，导致染色效果不够理想。　　六．思考题　　1.为什么芽孢染色法需要进行加热？能否用简单染色法观察到细菌芽孢？　　答:因为与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，而加热时芽孢的通透性高，此时染液可以进入从而使芽孢着色，而简单染色法不能使芽孢染色，所以不能看到。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。 为了适应公司新战略的发展，保障停车场安保新项目的正常、顺利开展，特制定安保从业人员的业务技能及个人素质的培训计划　　2.若在你的制片中仅看到游离芽孢，而很少看到芽孢囊和营养细胞，试分析原因。答：可能是因为芽孢的壁厚，耐受力比细胞体强，在涂片的过程中由于用力过大，使得细胞体的细胞壁被压碎，从而使得芽孢脱落出来；　　也可能是因为菌体培养时间过长，芽孢正处于复苏阶段，大多数芽孢从芽孢囊中游离出来了。　　可能是芽孢染色时水洗不充分，细胞还是孔雀绿的颜色菌种培养的环境太恶劣了，营养体几乎都变成芽孢了。　　可能是给芽孢染色用水洗时没洗干净，细胞还是孔雀绿的色彩。　　复染出现问题了，可能是复染时间不够，没染上，或是水洗的太厉害，把染液都冲走了。　　3.用孔雀绿初染芽孢后，为什么必须等玻片冷却后再用水冲洗？答:如果直接放到水下可能会导致玻片迅速受冷破裂。目的-通过该培训员工可对保安行业有初步了解，并感受到安保行业的发展的巨大潜力，可提升其的专业水平，并确保其在这个行业的安全感。