实验细菌的芽孢染色和鞭毛染色

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1、实验三细菌的鞭毛染色和芽孢染色主讲:徐尔尼生命科学学院生物技术系一、目的与要求学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征。巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用。二、基本原理1、鞭毛染色法细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.01－0.02μm，所以不能用光学显微镜直接观察到，必须采用特殊的染色方法，才能被观察。鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。二、基本原理2、芽孢染色法由于芽孢壁厚、透性低、不易着色，因此用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热条件下染

2、色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。三、实验器材1、菌种：普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌2、染色剂：硝酸银鞭毛染色液:(A液、B液）、芽孢染色液:（5%孔雀绿染液、0.5%番红染液）3、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等四、操作步骤1、鞭毛染色（硝酸银染色法）取一滴无菌水，滴于玻片一端　　　取一环菌置于无菌水中，让菌体

3、利用鞭毛运动开　　然后玻片倾斜，让菌液缓缓流向玻片的另一端　　室温自然干燥　　滴加染液A3-5min水洗用染液B冲去残水　　滴加染液B1-1.5min水洗干燥　　镜检结果：菌体深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形。操作要点：①菌种的培养时间为8-10h。②玻片要求光滑、洁净。③勿用接种环涂布制片。④制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥。⑤为使鞭毛清晰可见，水洗时尽量把载玻片冲干净。四、操作步骤2、芽孢染色涂片　　干燥固定　　滴加孔雀绿染液夹住玻片，微火加热至蒸汽冒出，维持5min水洗　　番红复染6min水洗　　干燥　　镜检结果：芽孢绿色，

4、营养体红色。操作要点：加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸。在冒蒸汽的条件下，维持足够的时间，否则染液不易进入芽孢内。待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，以免细菌被水冲掉。尽可能地把孔雀绿染液冲洗干净，以免影响番红的复染。五、实验数据及处理结果1、根据油镜观察结果，绘出枯草芽孢杆菌的形态特征（注意芽孢的形状及着生位置）。2、绘出普通变形杆菌的鞭毛形态特征。六、思考与讨论1、用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要注意哪些环节？2、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？3、说明芽孢染色

5、法的原理，用简单染色法能否观察到细菌的芽孢？下次实验项目：放线菌的形态观察、酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别