猪精液常温保存效果的研究于梦然

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1、湖南农业大学课程论文学院：动物科学技术学院班级：2008级畜牧班姓名：于梦然学号：200840511103课程论文题目：猪精液常温保存效果的研究课程名称：家畜繁殖学评阅成绩：评阅意见：成绩评定教师签名：日期：年月日猪精液常温保存效果的研究学生：于梦然（动物科学技术学院2008级畜牧班，学号：200840511103）摘要：主要从稀释液配方、稀释比例等方面研究了猪精液常温保存的效果。稀释液中影响精子活率的因素很多，主要有温度、稀释液的缓冲能力、组分、渗透压等。稀释比例也是影响精液保存效果的主要因素之一。关键词：精液；稀释；常温保存；精子活率为了有效地开展猪的人工授精，精液的稀释保存

2、是关键技术。精液冷冻技术的成功，使精液得以长期保存，但对猪而言由于技术难度大，也受成本高、受胎率较低的限制，猪的精液冷冻保存技术仍处于试验阶段。国际上，对猪精液常温保存十分重视。多年来国外研究者做了大量工作。取得了较好的效果。我国的许多科研工作者也进行了猪精液常温保存、授精效果和稀释液配方研制等方面的研究，且取得了一定的进展。但是，目前由于国产稀释液的保存效果不如进口稀释液，我国很多大型猪场依然采用进口的稀释液进行人工授精，昂贵的费用限制了该项技术的推广。因此，为了在基层、大型猪场普及和推广猪人工授精技术我们进行了本研究。1材料与方法1．1稀释液配制配方：葡萄糖(右旋糖)2.75

3、克，柠檬酸钠0.69克，碳酸氢钠0.1克，乙二胺四乙酸二钠0.235克，柠檬酸0.29克，氯化钾0.88克，青霉素1000IU/ml，双氢链霉素1000IU/ml，卵黄3ml。1．2采精时间：2011年04月20日。1．3精液处理与保存精子活率的染色采用伊红染色，在显微镜下观察。视野中被染成红色的精子为死精子。原精液活率在0.9以上。密度约为3×107～4×107。根据实验设计要求按比例等温稀释后装入青霉素小瓶中，缓慢降温至（17±0.5）℃，置于恒温箱中低温（17±0.5）℃保存。1．4精液品质检查方法1．4．1精子活率：直线运动的精子占视野中精子的百分率。1．4．2精子生存指

4、数：*时间间隔+xn-1tn-1/21．5试验设计1．5．1不同稀释比例的稀释液对猪精液的保存效果：稀释比例分别为1：1，1:3，每种稀释比例配制10个，间隔5小时测定一次精子活率。1.6精子活率检查取1～2滴精液滴于37℃恒温台上的洁净的载玻片上，盖上盖玻片，在显微镜下观察，计算视野中直线运动的精子。1．7数据处理计划采用t检验及方差分析进行数据处理。2结果2．1不同稀释液对猪精液的保存效果表1不同稀释液对猪精液的保存效果配方总存活时间生存指数1:171:34从上表可以看出，配方1:1稀释液对猪精液的保存效果更好，其总存活时间高于1:3稀释液。3讨论3．1猪精液常温保存稀释液配

5、方的设计稀释液中影响精子活率的因素很多，主要有温度、稀释液的缓冲能力、组分、渗透压等。本次实验我们的参考了互联网上查询的商业配方（Modena商品稀释液）设计了我们的配方。在猪猪网中查询得知在Modena稀释液中猪液的存活时间可以达到七天。由于实验室缺少一种缓冲物质二羟甲(基)氨基甲烷，根据渗透压的计算们用了KCL替代了该物质，之所以用KCL是因为强酸盐只对稀释液的渗透压有明显作用，并不影响其它缓冲对对稀释液ph值的作用。研究发现稀释液PH在5.8较适宜，因为精子本身PH值在7.0～7.5之间，为弱碱性，只有在弱酸性的环境中才能降低其代谢率，延长其寿命所以我们在本实验配方中采用了

6、柠檬酸和柠檬酸盐作为ph缓冲对，同时加入了碳酸氢钠是为了减少空气中二氧化碳对稀释液ph的影响。通过资料查询我们发现有研究人员认为用蜜糖代替葡萄糖效果更好，这是由于蜜糖中含葡萄糖、果糖、蔗糖和其他营养成分，并且有抗菌效果，价格低，蜜源丰富做为重要的为精子供能的物质，不过因为计算渗透压比较复杂我们采用了成分比较单一的葡萄糖和渗透压非常接近精液的卵黄做为精子的供能物质。EDTA是稀释液中相当重要的一个成分，它是一种螯合剂，能够与稀释液中的Ca2+等有害金属离子结合成稳定的络合物，增加精子的存活率。的在同一温度下保存精液，稀释液的组分和比例对保存效果起着决定性作用，本试验我们保存的精子最

7、长存活时间也不过7个小时，保存效果非常不理想，从成份上看稀释液的成份比较合理,也没有什么化学反应,没有对精子有害物质,所以精子存活率不高应该不是成分问题。最有可能导致精子存活率不高的原因有两个,一个是渗透压问题。在实验中我们仅仅参照了经验配方没有对渗透压进行精确计算。在对精子的观察的时候发现很多类似精子碎片的东西，所以怀疑是稀释液渗透压过低了，导致精子吸水破裂，不过因为显微镜不是很清晰，破片也不能洗的很干净影响了观察效果，所以并不能十分肯定的确定观察到的确实是精子碎片。另一个影响