标准菌种的管理与传代程序

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1、上海11制药有限公司标题文件号码:SMB-004发行日期:标准菌种的管理与传代程序版本号码:3第10页:共10页1.0目的Purpose标准菌种的管理与传代有一个比较规范的程序。2.0范围Scope上海11制药有限公司内的微生物实验室标准菌种的管理与传代。3.0适用文件ApplicableDocument(s)大肠杆菌检测标准操作程序〔ChP法〕SMB-102铜绿假单胞菌检测标准操作程序〔ChP法〕SMB-103金黄色葡萄球菌检测标准操作程序〔ChP法〕SMB-104沙门菌检测标准操作程序〔ChP法〕SMB-105大肠杆菌检测标准操作程序〔JP法〕SMB-112铜绿假单胞菌检测标准操作程序〔

2、JP法〕SMB-113金黄色葡萄球菌检测标准操作程序〔JP法〕SMB-114沙门菌检测标准操作程序〔JP法〕SMB-115大肠菌群检测标准操作程序〔Sankyo法〕SMB-122铜绿假单胞菌检测标准操作程序〔Sankyo法〕SMB-123金黄色葡萄球菌检测标准操作程序〔Sankyo法〕SMB-124革兰氏染色标准操作程序SMB-001培养基的营养试验SMB-011培养基配制与管理标准操作程序SMB－0074.0相关部门ResponsibleSection(s)质量管理部FD-002/0上海11制药有限公司标题文件号码:SMB-004发行日期:标准菌种的管理与传代程序版本号码:3第10页:共1

3、0页5.0物件准备5.1设备与仪器接种环，生物安全柜，-80℃冷冻冰箱，恒温培养箱，高压蒸汽灭菌器，5℃冰箱，1ml菌种冷冻管，放菌种冷冻管的盒子，塑封袋，标明菌种名称、接种日期及接种人的标签纸，1ml加样枪，烧杯，试管及配套硅胶塞，显微镜、水浴锅5.2试剂及菌种大肠杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、黑曲酶菌、10%甘油，灭菌生理盐水，革兰氏染色液、0.1%亚甲蓝液（注：本公司购入的菌种标准分为ATCC和CMCC两种）5.3培养基营养琼脂培养基，营养肉汤培养基、酪蛋白胨琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基、酵母霉菌琼脂培养基6.0操作步骤6.110%甘油的制

4、备：将甘油配制成10%浓度的溶液，然后用1ml加样枪，将10%的甘油溶液加到1ml菌种冷冻管中，盖上菌种冷冻管盖子，但不能将盖子拧紧。再将盖上盖子的菌种冷冻管放入烧杯内进行121℃、30分钟高压蒸汽灭菌。灭菌结束后，将烧杯中的菌种冷冻管放入生物安全柜内，拧紧盖子放入放菌种冷冻管的盒子内，再将盒子放入5℃冰箱保存，备用。6.2标准菌种制备与管理6.2.1标准菌种冷冻管的制备（第一代）将新购入的标准菌种在24小时内移入以上制备好的10％灭菌甘油内。即从5℃冰箱取出已准备好的10%灭菌甘油菌种冷冻管置于生物安全柜内，用冷却灭菌接种环从标准菌种斜面上挑取1～2个菌落接FD-002/0上海11制药有限

5、公司标题文件号码:SMB-004发行日期:标准菌种的管理与传代程序版本号码:3第10页:共10页种至10%的灭菌甘油菌种冷冻管中，制成108的菌悬液，拧紧菌种冷冻管的盖子放入相配套的塑封袋中，同时放入该菌的标签纸，再将放有同一种菌的小的塑封袋放入一个较大的塑封袋中，放入－80℃带锁的冰箱内。一般标准菌种在超低温冰箱内能保存5年，平均每年每种菌用4支冷冻管，每三个月用一支冷冻管。6.2.2第二、三代工作菌种的制备：6.2.2.1从超低温冰箱中取出所需的菌种冷冻管，置于35～40℃的水浴中进行解冻1分钟。6.2.2.2解冻后，放入生物安全柜内，用冷却后的灭菌接种环从冷冻管中取一环菌液接种于10m

6、l灭菌营养肉汤培养基中，置于35～37℃的培养箱内18～24小时，进行增菌培养。〔第二代〕6.2.2.3培养后，用冷却的灭菌接种环从增菌液中沾取一环接种于相应的培养基斜面上贴上菌种标签，置于35～37℃的培养箱内18～24小时，进行培养。〔注：第三代接种出的斜面数量是根据该月的该菌种的用量进行接种。菌种有效期以接入斜面培养基日起一个月。〕6.2.2.4培养后，进行革兰氏染色镜检并观察其菌落形态特征。确认符合后置于5℃的冰箱内保存。使用时将培养出的斜面用5ml的灭菌生理盐水将斜面上的菌落洗下制成108菌悬液使用。〔第三代〕6.2.2.5在第三代菌种有效期内进行第四代的接种传代。6.2.3第四、

7、五代工作菌种的制备：6.2.3.1从5℃的冰箱内取出第三代工作菌种，用冷却的灭菌接种环挑取1个菌落接种于相应的琼脂斜面培养基中，置于35～37℃的培养箱内培养18～24小时后，进行革兰氏染色镜检同时观察其菌落形态特征。确认符合后置于5℃的冰箱内作为第四代工作菌种保存，备用。〔注：第四代接种出的斜面数量是根据该月的该菌种的用量进行接种的。菌种有效期以接入斜面培养基日起一个月。〕FD-002/0上海11制药有限公