《刘藏中文翻译》word版

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1、利用微卫星技术对狗牙根遗传图谱进行扩增摘要狗牙根品种的遗传连锁图谱使用了来自T89和T574的118个三倍体，这118个三倍体富集与表达了序列标签衍生的简单重复序列（EST-SSR）。引物来源于53个富含制造75分离标记物的EST，其中的28个可以映射到T89和T574遗传图谱。随着先前生成的标记数据，26个T89连锁群和八个T574连锁群，形成使用4.0的赔率（LOD）值。该T89和T574连锁图谱跨越1055cM和311.1cM，其中包括125和36单剂量扩增片段（SDAFs）。许多SDAFs显示二体分离，因此T89

2、可以是一个异源的四倍体。通过增加标记密度在地图上附加EST-SSR标记增值，并可以很容易地转移到其他狗牙根资源中。此外，EST-SSR标记可以立即用于评估材料的遗传多样性，确定非突变狗牙根品种，确认谱系，并从“天堂草品种衍生污染物中分化出来。百慕大既是最好的暖季型草坪草，又是优良的牧草，同时也是世界四大恶性杂草之一。通用的百慕首先被引入是在殖民时期的美国，并很快在整个美国南部蔓延。品种发行来自于Tifton，GA，是通过非洲狗牙根[狗transvaalensis（2N=2X=18）与常见类型狗牙根杂交产生的不育三倍体杂交

3、种的改良。目前其他草坪草育种计划最近开发了无性改善或种子繁殖。狗牙根具有很大有利于推广和普遍使用的性状。百慕大具有耐盐、耐热和耐旱的特性，并且具有发达的匍匐茎，繁殖能力及再生能力。尽管有这么多的特质，基因控制这些特征尚未确定，仅有少数分子工具被开发。虽然狗牙根品种往往是多倍体，但基于singledose遗传连锁图谱的限制性片段框架已成功构建。SDRFs或者可作为仅在交叉父母一方染色体的单剂量扩增片段标记存在，因为SDAFs存在于1：1的配子，它们可以被用来制图在多倍体倍性水平或染色体配对。随着SDAF映射可以为每个材料分

4、别产生一个连锁图谱。形成的四个同源四倍体是用双亲的采用155SDRFs地图。对于T574（二倍体）地图，77SDRFs形成7同源集。随着T89和T574具有61％和62％的标记覆盖映射其基因组，分别附加标记填补缺口以及链接同源联动群体。近日，狗牙根抗性基因类似物已被识别并添加到地图。增加标记密度，需要映射的特征，如线虫宽容，根长和草坪质，这可能是两个亲本之间的不同。因此，这样做的研究目的是开发EST-SSR标记，同时可用于鉴定同源连锁群和丰富的狗牙根遗传图谱。此外，这些SSR标记是要评估一组密切相关的基因型和用于识别单一

5、栽培种质的基因型之间差异。材料和方法W.汉纳（格鲁吉亚，蒂夫顿大学，GA）创造了T89三倍体作物群体。从狗牙根品种天堂草，JonesDwarf，FloraDwarf，Tifdwarf，老鹰草，冠军，Tifway，TifwayII，TifSport和TifGrand中获得节子，获得了两次奖励。倍体分析。三倍体倍性水平得到了证实。从盆栽分离新鲜组织（〜0.5平方厘米）使用是双刃剃须刀切碎，加入600毫升核提取缓冲液（PARTEC，明斯特，德国）以释放核。将该淤浆倒入50毫米的过滤器并加入1.6毫升PARTECDAPI染色缓冲

6、溶液，在PAS-Ⅲ流式细胞仪上用PARTEC细胞分析器对至少5000个荧光颗粒进行计数。T89和T574被用作控制因素，三倍体倍性levelwas加入T89T574，并且每个样品的F1代和未知GAP1（G1）峰的确认证实是控制在G1峰之间。简单重复序列生成。使用PureLinkDNA纯化试剂盒从118F1田间生长的个体提取DNA，根据基因型T89，对含143个SSREST的序列进行鉴定，但不通过聚合酶链反应证实。引物使用引物3的侧翼SSREST序列（见表1）。SSR扩增和荧光标记检测使用的是改进的M13尾引物法。.PCR

7、反应总体积为在0毫升，包括2μL5×buffer、1μL模板DNA2.5ng/μL、1μLMg2+2.50mmol/L、0.8μLdNTP0.25mmol/L、1.0μLPrimer、0.04μLTaqDNA聚合酶、3.16μLSterilewater。具体扩增程序为：94℃预变性3min，94℃变性30s，50-60℃退火1min，72℃延伸70s，循环39次；72℃延伸10min，4℃储存以备以后使用。两微升的PCR产物是5mL蓝和0.35mL混合物并装载在6.5％丙烯酰胺凝胶。凝胶图像视觉得分。遗传图谱，使用SSR

8、分子标记技术对118个F1后代进行数据隔离，其结果被记录到一个使用Joinmap？4基因型的代码一BC1群体的一个Excel工作表中SSR标记数据与来自伯特利等的限制性片段长度多态性（RFLP）数据合并，这些标记显示偏分离，由C2确定的从映射中被排除的0.05或更低的显着性水平，分析为被排除。一个LOD4是用于分组，