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1、动植物重测序五大研究方案2013/08/01 随着越来越多的物种基因组被破译,重测序的应用也日趋广泛。历时半年,华大科技科研团队根据动植物群体样本类型以及研究领域特点,并融合多年的项目经验,隆重推出重测序研究五大方案,为您提供系统全面的一站式服务,助力项目申请和高水平文章的发表! 方案一:育成动植物驯化基因挖掘方案研究目的: 针对不同的品种/品系,通过群体内pooling建库的方法,进行全基因组重测序(5X/群体),采用生物信息学方法全基因组范围内扫描变异位点,并进行选择性清除分析(SelectiveSweeps),结合相关区域的基因功能注释信息,挖掘驯化相关的基因,剖析家养动
2、植物的驯化条件、驯化过程及其进化动力。技术路线: 研究方案:样本量选择:家养动植物各品系,及其现存祖先种(每个品系可以选择>10个个体等量DNA混合pooling);测序策略选择:各品系多个个体poolingDNA样品进行PE101测序;测序深度选择:全基因组重测序>5Xcoverage/品系。 适用范围:驯化动物:如家鹅、家鹅、家鸭、家猫、家牛等;栽培植物:如水稻、玉米、小麦、大豆等粮食作物;苹果、梨、苜蓿、葡萄等经济作物。 方案特色:1、 高效快速:不需要作图群体,只需要驯化动植物的现有各品种的DNA样本;2、 成本降低:通过将同一品系中的多个个体(10个左右)进行pooli
3、ng测序,在兼顾品系代表性的同时最大限度地降低了测序量;3、 可行性高:目前,运用该思路成功完成驯化研究的动物包括家蚕、家鸡和家犬。 经典案例:§样品选取:– 分布于世界各地的不同品系的狼和犬,其中狼7个品系,犬14个品系 §测序策略– 对12只狼的DNA样本进行pooling测序,深度为6.2X;对60只犬的DNA样本进行pooling测序,测序深度为29.8X§分析结果– 识别了380万个遗传变异位点;– 在犬的基因组中共发现36个明显受驯化选择的区域,包含122个基因;– 发现19个与脑发育相关的基因、3个与精子受精过程竞争相关的基
4、因、10个与淀粉和脂肪代谢相关的基因。 参考文献:[1]Rubin,C.J.etal.Whole-genomeresequencingrevealslociunderselectionduringchickendomestication.Nature464,587-591;[2]Leonard,J.A.etal.AncientDNAevidenceforOldWorldoriginofNewWorlddogs.Science298,1613-1616. 方案二:eQTL方案 研究目的: 通过测序获得各基因型的表达数据,并作为一个数量性状,进行基因表达的数量定位分析(eQTL
5、),进而寻找控制基因表达的上游调控位点,挖掘受该基因调节的下游基因及与该基因协同作用的基因,并建立基因调控网络,从而在表达及调控两个水平上研究控制复杂性状的遗传基础。技术路线:研究方案:样本量选择:分离群体(DH,RIL,F2,F3,BC等),建议样本数100个以上。测序策略选择:有参考基因组:芯片测序/重测序(3-5X/样品)+RNA-Seq(5Mcleanreads/样品);无参考基因组:转录组测序(2-4Gcleandata/样品);项目周期:样本个数≤100,需90个工作日;样本个数>100,需根据实际项目情况而定。 适用范围:拥有作图群体的动植物。 方案特色:1、更精细的
6、遗传连锁图谱(若分子标记连锁图谱未知);2、更精确的作物农艺、经济性状(或目标性状)相关候选基因定位;3、更快捷的基因表达调控网络构建;4、可与其他结果或方案(如QTL结果,GWAS方案等)相互衔接。 经典案例:§样品选取– 368份玉米自交系(3个作图群体:Illinoishigh-oil群体,Alexho单籽粒合成群体,北京高油群体)§测序策略– 对样本分别进行转录组测序,平均每个样品6.6Gbrawdata,获得103万个SNP;使用IlluminaMaizeSNP50BeadChip获得56110个SNP,再将两部分SNP数据整合用于后续分析。§分析结果
7、– 利用RNA-seq测序以及IlluminaMaizeSNP50BeadChip的办法获得了一百多万个单核苷酸多态性(SNP)位点;– 利用全基因组关联分析的方法,对籽粒油份相关性状进行了分析,共发现74个基因(loci)与籽粒油份显著关联,其中三分之一是编码油脂代谢的关键酶基因;– 发现26个与玉米籽粒总含油量显著相关的基因,可以解释总油份83%的表型变异,为玉米油合成的遗传机制提供了视角,并有助于高油玉米的分子育种。 参考文献:[1
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