《有机磷实验过程》word版

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1、一、有机磷提取：分别测定H2O、HCl、NaOH-EDTA提取液的DTP、SRPH2O-Po:DTP：取4mL水提取液于25mL比色管中，定容至10mL，加入1.6mL5%的过硫酸钾，在高压消煮锅中消煮45min，冷却，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。SRP：取4mL水提取液于25mL比色管中，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。标曲：分别吸取2mg/L的磷酸盐标准使用液0、0.5、1、1.5、2、3、5、7mL于25mL比色管中，按DTP、SRP测定方法测定。HCl-Po:DTP：取0

2、.4mLHCl提取液于25mL比色管中，定容至10mL，加入1.6mL过硫酸钾，在高压消煮锅中消煮45min，冷却，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。SRP：取0.4mLHCl提取液于25mL比色管中，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。标曲：分别吸取2mg/L的磷酸盐标准使用液0、0.5、1、1.5、2、3、5、7mL于25mL比色管中，按DTP、SRP测定方法测定。NaOH-EDTA-Po:DTP：取2mLNaOH-EDTA提取液定容至50mL,再取稀释后的4mL于25mL比色管中，定

3、容至10mL，加入1.6mL过硫酸钾，在高压消煮锅中消煮45min，冷却，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。SRP：取2mLNaOH-EDTA提取液定容至50mL,再取稀释后的4mL于25mL比色管中，定容至25mL，加入4ml显色剂充分混匀，显色15min后，在880nm下比色。标曲：分别吸取2mg/L的磷酸盐标准使用液0、0.5、1、1.5、2、3、5、7mL于25mL比色管中，按DTP、SRP测定方法测定。显色剂配制：5N硫酸70mL浓H2SO4定容至500mL酒石酸锑钾1.3715g定溶至500mLH2O中钼酸铵20g定溶至

4、500mL水中0.1M抗坏血酸1.76g定溶至100mL水中显色剂的配制（100mL）：50mL5NH2SO45mL酒石酸锑钾15mL钼酸铵30mL0.1M抗坏血酸将上面四种溶液按比例混合，一般混合好的显色剂可以保存4h。磷钼蓝比色法是在50mL样品中加入8mL配好的显色剂，显色10—15min，在880nm下比色。二、酶解:H2O-Po酶水解取5mL水提取液，分别加入0.44ml的不同类型酶溶液，加入0.5ml0.4mol/L的MgCl2溶液，0.05ml0.68mol/L的柠檬酸钠溶液，于37℃条件下培养16h，（植酸酶培养条件为55℃），取出后加入1ml20%的SDS溶液

5、（sigmaL4509，气温较低时易凝结，使用时需加热融化）定容至10ml，加入1.6ml显色剂880nm显色测定正磷酸盐量。标线：取1mg/L的磷标液0、0.2、0.5、1、2、3、5ml，与水提取液酶解同步进行。APase溶液：称取2.5mg碱性磷酸酶用Tris9.0定容至10ml，此时碱性磷酸酶活性为7U/ml，再取1.4285ml即可配制出活性为1U/ml的碱性磷酸酶使用液。APase+PDEase：称取10mg二酯酶和1.4285ml活性为7U/ml的碱性磷酸酶溶液，用Tris9.0定容至10ml。Phytase溶液：取120mg植酸酶定溶于10ml的10mM的HAc

6、-NaAc（PH5.15）缓冲溶液中，转移至透析管中（MWCo：3500-5000，spectumlaburationes.Inc,10ml），悬浮于装有2L10mM的HAc（0.16ml至1L）-NaAc(0.59g至1L)缓冲溶液的烧杯中透析，每隔3小时更换烧杯中透析液一次，连续更换5次，透析后的酶溶液于10000r/min离心10min。植酸酶在4℃条件下只能保存一周。使用Tris7.0配制成活性为0.06U/ml的酶溶液使用。取1.6667ml透析后的植酸酶溶液（活性为0.36U/ml）用Tris7.0定容至10ml。APase+PDEase+Phytase溶液：分别取

7、1.4285ml碱性磷酸酶溶液（7U/ml），10mg二酯酶、1.6667ml植酸酶（0.36U/ml）用Tris7.0定容至10ml。NaOH-EDTA-Po酶水解取4mLNaOH-EDTA提取液定容至100mL，PH值调为7.0（植酸酶为5.15），取2mL定容至5mL，分别加入0.44ml的不同类型酶溶液，加入0.5ml0.4mol/L的MgCl2溶液，于37℃条件下培养16h，（植酸酶培养条件为55℃），取出后加入1ml20%的SDS溶液（sigmaL4509）定容至10ml，加入1