月季月月红酵母单杂交cdna文库及rrmyb7诱饵载体构建研究

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1、华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文是否保密舀如需保密，解密时间年月目独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书丙使用过的材料．指导教癖对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所敛的任何贡献均已在论文中做了明确豹说明，并表示了谢意．研究生签名：谰8时闻：知j卜年25月勺日学位论文使用授权书零人完全了解华中农

2、业大学关予保存．使用学位论文的规定，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力．洼：保密学位论文(印涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在譬要提交保密的论文)在解密后适用于本授权书．㈨黼始错矾铷娩寺【璇签名日期：乃I卜年5月?日签名日期：；b丫年o‘月f。鑫月

3、季“月月红”酵母单杂交eDNA文库及I?rMYB7诱饵载体构建目录摘要。iAbstact．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．iii缩略语表．v第一章文献综述1lMYB转录因子研究进展l1．1MYB转录因子的结构特征和分类．21．2MYB基因家族的功能32酵母双杂交及酵母单杂．52．1酵母双杂交原理62．2酵母双杂交技术在植物研究中的应用。72．3酵母双杂交的优缺点102．4酵母单杂交原理及应用113研究的目的和意义。13第二章“月月红”酵母单杂交eDNA文库的构建．13l引言142材料与方法142．

4、1植物材料142．2主要试剂和药品142．3培养基142-4酵母单杂交AD—eDNA文库的构建．152．4．1dseDNA的准备152。4。2酵母感受态的制备．192．4．3酵母单杂交eDNA文库的建立．203结果与分析223．1“月月红”花瓣与花芽mRNA和SMART双链eDNA的质量．．223．2酵母单杂交AD．eDNA文库效率的鉴定．244．讨论一25第三章MYB7基因诱饵载体的构建一261MYB7酵母双杂交诱饵载体的构建．261．1引言一26华中农业大学2014届硕士研究生学位论文1．2材料与方

5、法261．2．1菌株和质粒．261．2．2试剂盒及常用试剂．261．2．3培养基．271．3玫瑰MYB7基因酵母双杂交诱饵载体的构建271．3．1基因引物设计及MYB7基因cDNA全长的克隆．271．3．2片段回收与连接一281．3．3克隆载体转化大肠杆菌并进行阳性克隆筛选．291．3．4质粒提取一291．3．5双酶切及目的片段的回收与连接、热激．301．3．6筛选阳性克隆并提质粒双酶切检测3l1．3．7重组质粒转Y187321．4结果与分析331．4．1MYB7诱饵载体的构建331．4．2酵母Y187

6、转化菌株的鉴定．．341．5讨论一352MYB7基因启动子克隆．362．1引言．362．2玫瑰基因组DNA的提取．．362．3引物设计372．5结果与讨论39第四章前景展望．42参考文献43附录50致谢53U月季“月月红”酵母单杂交cDNA文库及Rr／,／YB7诱饵载体构建摘要转录因子通过激活或者抑制基因的转录表达来调节植物体内的各种生理生化过程，植物中包含许多的转录因子家族，MYB基因家族就是其中一类。多年来人们对植物体内的MYB转录因子进行了大量的研究，分析其蛋白的结构及功能，现有研究表明MYB蛋白

7、在植物生长发育的多个阶段包括植物次生代谢、植物细胞形态建成以及植物抗逆胁迫应答等方面都起着重要作用。目前，对MYB转录因子的研究大部分还停留在分析其生理功能或单个MYB基因的作用方面，对于MYB蛋白调控网络的研究、MYB基因家族成员间的互作以及MYB基因与其它转录因子家族之问的作用机制还缺乏了解。探讨多个基因甚至整个MYB家族基因问的复杂调控网络有助于在整体水平上利用MYB基因对植物进行定向改良，这将成为今后对MYB基因家族的研究重点。为了探索MYB基因家族的复杂调控网络，可以运用酵母双杂交及酵母单杂交

8、技术来找寻MYB蛋白及MYB基因启动子的互作蛋白编码序列。我们选择可能与植物生长与开花相关的MYB基因家族成员MYB7作为研究对象，以周年开花不断的蔷薇科植物“月月红”(Rosachinensis‘Slater’ScrimsonChina’)作为植物材料，构建了“月月红”酵母单杂交cDNA文库和MYB7酵母双杂交诱饵载体PGBKT7．MYB7，并运用FPNI—PCR方法扩增出MYB7基因上游1．86kb长度序列，为后期的酵母单杂交和酵母双杂