河北道地药材色谱指纹图谱研究论

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1、河北道地药材色谱指纹图谱研究范丽芳 【摘要】：第一部分河北道地药材紫菀指纹图谱研究紫菀为双子叶菊科植物紫菀(AstertataricusL.f.)的干燥根及根茎。具有润肺下气,消痰止咳的功效。紫菀中含有的三萜类成分(紫菀酮、木栓酮、表木栓醇等)为发挥药效的主要物质,且紫菀酮为其祛痰的有效成分之一。河北省为紫菀药材的主要产区,安国产紫菀药材素有“祁紫菀”之称。由于受地理因素和生长环境的影响,不同产区紫菀的化学成分及其含量不尽相同,紫菀酮的含量随地区的不同差异很大。目的:建立河北道地药材紫菀的HPLC指纹图谱,得到对照图谱,并与不同产

2、地紫菀药材指纹特征相比较,计算相似度;并对其有效成分紫菀酮进行含量测定,为科学评价与有效控制紫菀药材质量提供新方法。方法:1指纹图谱研究(1)提取:比较了不同提取溶剂、不同提取方法及不同提取时间的提取效果,选择提取成分较多,提取率较高的提取条件。(2)色谱条件:选用合适的色谱柱、检测器及检测波长,调整流动相的组成、配比、流速,调节柱温,使色谱图符合指纹图谱研究的要求。(3)系统适用性试验:在已确定的色谱条件下,考察指纹图谱中紫菀酮色谱峰的分离度和理论板数。(4)精密度试验:制备样品溶液1份,重复进样6次,记录保留时间和峰面积。(5

3、)重复性试验:平行制备样品溶液6份,分别进样,记录保留时间和峰面积。(6)稳定性试验:制备样品溶液1份,分别于0,2,4,6,8,12,24h进样,记录保留时间和峰面积。(7)指纹图谱的建立:分别取道地紫菀药材10批,其他不同产地的紫菀样品7批,制备样品溶液,进行指纹图谱分析、相似度评价。2紫菀酮的含量测定(1)提取:同指纹图谱项下。(2)色谱条件:在指纹图谱色谱条件的基础上,改变流动相配比,使待测物峰在较短的时间内达到较好的分离。(3)系统适用性试验:在以上色谱条件下,对样品溶液进行HPLC检测,记录紫菀酮色谱峰的理论板数和分离

4、度。(4)标准曲线的制备:配制系列浓度的紫菀酮对照品溶液,分别进样,记录峰面积;以紫菀酮的浓度为纵坐标,相应的峰面积为横坐标,绘制标准曲线。(5)精密度试验:制备样品溶液1份,重复进样6次,记录峰面积。(6)重复性试验:取同一批药材,平行制备样品溶液6份,分别进样,记录峰面积。(7)稳定性试验:制备样品溶液1份,分别于0,2,4,6,8,12,24h进样,记录峰面积。(8)回收率试验:取已知紫菀酮含量的紫菀药材适量(约含紫菀酮为含量项下的50%)6份,分别加入适量的紫菀酮对照品溶液,平行制备同一浓度的样品,测定紫菀酮的含量。(9)

5、检测限的确定:将紫菀酮对照品溶液逐步稀释,信噪比S/N≥3时的进样量确定为检测限。(10)样品测定:在已确定的色谱条件下,测定17批紫菀药材中紫菀酮的含量。结果:1指纹图谱研究(1)提取:甲醇超声提取20min,重复性好,提取效率高。(2)色谱条件:色谱柱为DiamonsilTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈-0.05%磷酸为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0mL/min,柱温为30?C,检测波长为200nm,进样体积为20μL。(3)系统适用性试验:在以上色谱条件下,紫菀酮的保留时间约为84min,按紫菀酮色谱峰

6、计算理论板数约为3.0×103,与其他色谱峰的分离度大于1.5。(4)精密度试验:以紫菀酮为内参照峰,计算各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值的RSD分别为0.11%～1.3%和0.18%～1.5%;利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版软件计算,相似度均大于0.9,说明精密度良好。(5)重复性试验:各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值的RSD分别为0.12%～1.1%和0.31%～2.9%,相似度均大于0.9,说明重复性良好。(6)稳定性试验:各主要色谱峰相对保留时间和相对峰面积比值的RSD值分别为0.19%～1

7、.7%和0.29%～2.1%,相似度均大于0.9,说明样品溶液在24h内稳定。(7)指纹图谱的建立:得到10批道地紫菀药材的指纹图谱及其20个共有峰,同时得到不同来源紫菀药材的指纹图谱。(8)数据分析:运用相似度评价系统2004A版软件计算,10批河北道地药材相似度均在0.95以上,批间差异较小,春秋两季采收无明显差异。但不同产地的药材与河北道地药材生成的对照指纹图谱相比,相似度相差较大。2紫菀酮的含量测定(1)提取:同指纹图谱项下。(2)色谱条件:流动相为乙腈,流速为2.0mL/min,其他条件同指纹图谱项下。(3)系统适用性试

8、验:在以上色谱条件下,紫菀酮的理论板数为9.8×103,分离度大于1.5。(4)标准曲线的制备:紫菀酮浓度在0.099～0.895mg/mL范围内呈良好的线性关系,回归方程分别为Y=2.500×10-3+9.800×10-8X,r=0.9996(n