蜡梅转录因子基因anl2的克隆和功能探究-林学专业毕业论文

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1、蜡梅转录因子基因ANL2的克隆和功能探究目录摘要．iAbstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．iil前言l1．1植物转录因子的研究进展．．11．1．1植物转录因子的发现和概念l1．1．2植物转录因子的结构21．1-3植物转录因子的分类31．2植物转录因子HD—ZIP的研究概况41．2．1植物转录因子HD．ZIP的来源41．2．2植物转录因子HD-ZIP的结构和分类51．3植物转录因子ANL2的研究概况91．4研究目的、内容及意义101．5技术路线112蜡梅转录因子基因ANL2的克隆和序列分析122．1前言一122．2材料和方法122．2

2、．1实验材料．122．2．2实验方法．132．2．2．1蜡梅花瓣RNA的提取和检测．132．2．2．2蜡梅花eDNA第一链的合成和检测．．142．2．2．3CpANL2的克隆152．3结果与分析172．3．1蜡梅花朵RNA质量的检测_172．3．2CpANL2全长克隆182．3．3CpANL2的生物信息学分析192．3．3．1CpANL2的碱基序列分析一192．3．3．2CpANL2基因的氨基酸序列和蛋白质性质分析193蜡梅CpANL2基因表达量分析．233．1前言233．2材料和方法．233．2．1材料、仪器和试剂～233．2．2实验方法233．2．2．1蜡梅砌、『A的提

3、取．．233．2．2．2蜡梅RNA反转录成eDNA第一链243．2．2．3CpANL2基因RT-PCR。243．3结果与分析。25万方数据华中农业大学2015届硕士学位论文3．3．1蜡梅花RNA质量检测253．3．2实时定量PCR实验结果254蜡梅CpANL2基因植物双元表达载体的构建和农杆菌转化264．1材料和方法．264．1．1实验材料．264．1．2试剂和仪器。264．1．3实验方法一274．1．3．1目的片段加酶切位点引物274．1．3．2CpANL2-pEASY-T1重组质粒和pCAMBIA2300质粒的提取274．1．3．3CpANL2-pCAMBl,42300

4、的构建．．284．1．3．4CpANL2-pCAMBbt2300重组质粒转化农杆菌一294．1．3．5CpANL2-pCAMBIA2300重组质粒转化农杆菌菌落检测．．304．2结果与分析．304．2．1CpANL2-pCAMBIA2300表达载体的构建．．304．2．2CpANL2-pCAMBbt2300重组质粒转化农杆菌．3l5CpANL2的遗传转化研究．．325．1材料和方法．325．1．1实验材料_325．1．2试剂和仪器325．1．3实验方法一335．1．3．1农杆菌介导法转化拟南芥一335．1．3．2农杆菌介导法转化烟草一345．2．1农杆菌介导法转化拟南芥．3

5、55．2．1．1农杆菌介导法转化野生型拟南芥．．355．2．1．2农杆菌介导法转化突变体拟南芥375．2．2农杆菌介导法转化烟草一396结论与讨论．．416．1蜡梅CpANL2的克隆416．2蜡梅CpANL2基因的序列和蛋白质生物信息学分析4l6．3蜡梅CpANL2表达量分析426．4蜡梅CpANL2基因植物双元表达载体的构建和农杆菌转化436．5蜡梅CpANL2基因功能探究437总结与展望．44参考文献45致谢．．：；：!II万方数据蜡梅转录因子基因ANL2的克隆和功能探究捅要蜡梅(ChimonanthuspraecoxL．)，是蜡梅科蜡梅属的一种观赏性极强的树种，素以于

6、寒冬腊月傲雪盛放而名，花朵颜色淡雅，花香扑鼻，沁人心脾。在蜡梅的研究中，蜡梅品种分为素心蜡梅品种群、晕心蜡梅品种群和红心蜡梅品种群，其中素心蜡梅花朵通体黄色，清新淡雅，而红心蜡梅内被片呈紫红色，中被片和外被片呈淡黄色，总体色彩层次有致，观赏性极高。在拟南芥中，ANL2转录因子调控拟南芥叶片和茎中花青素的分布，蜡质的合成以及根部细胞发育。本文对蜡梅ANL2转录因子进行探究，克隆到ANL2的全长片段，构建植株双元表达载体pCAMBIA2300-CpANL2，农杆菌介导法浸染拟南芥野生型、拟南芥突变体和烟草，得到转基因植株，对转基因植株的表型进行研究和分析。主要研究结果如下：1．

7、筛选转录组库中的ANL2转录因子，克隆其全长，进行生物信息学分析，包括保守结构域分析，系统进化分析和蛋白质预测，命名为CpANL2。2．提取素心蜡梅和红心蜡梅不同花期的RNA，反转录成cDNA，通过实时定量PCR测定CpANL2在不同蜡梅品种、不同花期和花朵不同部位的表达量差异。通过研究结果的分析，推测CpANL2可能调控类黄酮代谢通径中影响槲皮素合成的上游基因的表达，进而影响花青素的合成。3．构建CpANL2-pCAMBIA2300植物双元表达载体，通过热激法将目的基因转入农杆菌GV3101中。采用花序浸染法浸染