本次实验项目

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1、本次实验项目：　　　　　　　　酶特性实验本次实验课时：4学时实验类型：综合性教学要求：1.学生能根据所给的实验条件，能够制备酶的粗提液.2.检测出酶具有特异性，酶促反应速度受激活剂和抑制剂的影响.3.同时学会测定酶激活剂和抑制剂影响酶反应速度的方法和原理。重点：考察学生的实验能力和对实验结果的综合分析能力.难点：对实验结果的综合分析教学手段及教具：课堂讲授，学生实验操作。讲授内容及时间分配：课堂讲授1．实验简介……………………………………………………………　　　　　……0.1学时2．酶特性的相关知识……………………………………………………………………0.2学时3．酶的专一性实验…………

2、……………………………………………………………0.3学时4．唾液淀粉酶的活化和抑制实验………………………………………………………0.2学时实验教学酶特性实验的操作技术…………………………………………　　　………………3学时参考资料《生物化学实验技术简明教程》实验教学教案首页实酶特性实验（综合性）相关知识1.还原糖：是指具有还原性的糖类。在糖类中，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖（含有游离醛基，这是因为单糖具有游离的羰基或者半缩醛羟基之故。）蔗糖和淀粉是非还原糖。2.常用的检测还原糖存的试剂有两种，费林试剂和本尼迪试剂。均为含有Cu2＋的碱性溶液，能使还

3、原糖的自由醛基或酮基氧化，其本身则被还原成砖红色或黄色的Cu2O沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。菲林实际就是把硫酸铜溶液和氢氧化钠混合得到本尼迪克特就是把硫酸铜溶液和碳酸钠以及柠檬酸钠混合得到3.淀粉遇碘呈色：直链淀粉遇碘时呈蓝色。支链淀粉遇碘时呈紫色，4．酶的提取应注意事项·尽量减少酶活性的损失·低温，pH适度·有机溶剂：-15~-20摄氏度预冷,逐滴加入，边轻搅。·若抽提液（缓冲液）需加入EDTA和巯基乙醇，加入过程中不能过度搅拌，以免产生大量泡沫，使酶变性或者失活5．影响酶促反应速度的因素：温度、底物浓度、pH值、酶浓度、激活剂与抑制剂等。6．酶促反应特点：专一性、高效性、在

4、温和条件下、易受体内其它因素调控第一部分　　酶的专一性一、实验目的1.酶的制备：学会从原料中提取酶的方法――――制备酶的粗提液。2.酶的专一性：掌握检查蔗糖酶和淀粉酶特异性的方法及原理。二、实验原理酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖的作用为例，说明酶的专一性。唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性的麦芽糖。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖。本实验中Benedict试剂含有Cu2＋的碱性溶液，能使还原糖氧化而本身被还原成红色（颗粒大）或黄色（颗粒小）的。用Benedict试剂与反应液共热检查糖的还原性。三、实验仪器、材料和试剂（一）仪器：试管、移液管、小烧杯、离

5、心管、研钵、试管架　（二）材料：干啤酒酵母、唾液（三）试剂1.1%淀粉溶液（用0.3%氯化钠溶液新鲜配制，注意淀粉不好溶解，先少加点溶剂，加热着溶，）0.5g+50ml（0.15+50ml）2.0.1%淀粉溶液（用0.3%氯化钠溶液新鲜配制）　0.05g+50ml（0.15+50ml）3.2%蔗糖溶液（用蒸馏水溶解即可）1g+50ml4.蔗糖酶溶液（粗提酶液）：取干酵母20克（4克），置于研钵内，添加120ml（25ml）蒸馏水和少量石英砂（半勺）。用力研磨提取约40min，再加蒸馏水（10ml），使总体积约为180毫升。分装到2支离心管中，4600rpn/min，离心10分钟。上清备

6、用。5.稀释唾液：稀释50~150倍的新鲜唾液（10ml水）。　1.Benedict试剂：称取柠檬酸钠173g及碳酸钠（Na2CO3•H20）100g加入600mL蒸馏水中，加热使其溶解，冷却，稀释850mL。另称取17.3g硫酸铜溶解于100mL热蒸馏水中，冷却，稀释至150mL。最后，将硫酸铜溶液徐徐地加入柠檬酸－碳酸钠溶液中，边加边搅拌，混匀，如有沉淀，过滤后贮于试剂瓶中可长期使用。四、实验操作步骤管　号1234561%淀粉溶液（ml）3－3－3－2%蔗糖溶液（ml）－3－3－3稀释唾液(ml)－－11－－蔗糖酶溶液（ml）11蒸馏水（ml）11－－－－37℃恒温水浴15分钟Be

7、nedict试剂（ml）222222沸水浴2~3分钟现象问题：1，5管为什么反应略显阳性五、结果与分析1．观察记录每管变化结果，并解释其原因。2．阐述蔗糖酶和淀粉酶的专一性。问题：淀粉和蔗糖属非还原糖还是还原性糖？为什么用Benedict试剂来检测淀粉或蔗糖被酶水解的程度？Benedict试剂与还原糖的反应机制？六、注意事项第二部分　　激活剂和抑制剂对酶活力的影响一、实验目的1．学会测定酶激活剂和抑制剂影响酶反应的方法的原理。2．通过实验可以确