法尼醇对白念珠菌camp-pka信号通路作用的研究

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1、南京医科大学硕士学位论文分类号：R783单位代码：10312密级：学号：20121249南京医科犬掌硕士学位论文题法尼醇对白念珠菌c龇唧．PKA信号通路作用的研究研究生：曹雪姣指导教师：魏昕学科专业：口腔临床医学学院名称：南京医科大学口腔医学院完成时间：二。一五年五月十日万方数据南京医科大学硕士学位论文南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明

2、。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：巷昏啵日期：阳I，年6月夕日导师签名：日期：动心年6月9日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“√”)：I、保密口，在一年解密后适用本授权书。2、不保密√作者签名：鬯嗽日期：加S年6月171日导师签名：日期：如／s年6

3、月7日万方数据南京医科大学硕士学位论文项目资助本论文是在国家自然基金面上项目国家“法尼醇对白念珠菌生物膜耐药相关信号通路的调控机制”(项目编号：81371156)；江苏高校优势学科建设工程资助项目(2014．37)资助下于南京医科大学151腔疾病研究江苏省重点实验室完成。万方数据南京医科大学硕士学位论文目录中英文对照表1中文摘要2英文摘要6—1L—．L月U舌10实验一法尼醇对白念珠菌浮游状态和生物被膜状态氟康唑药物易感性的影响．131材料和方法．．142结果．173讨{念．．194小结．．21实验二法尼醇对白念珠菌cAMP．PKA信号通路的作用．221材料和

4、方法．232结果一273讨{念．．364小结．．40全文小结．41参考文献．42综述49攻读学位期间发表文章情况．58致{射59万方数据南京医科大学硕士学位论文PBSPhosphateBufferedSaline磷酸盐缓冲液SDASabourd’SDextroseAgar沙堡琼脂培养基famesol法尼醇YPDYeastPeptoneDextroseMedium酵母膏胨葡萄糖培养基DEPCDiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯2,3-Bis(2-Methoxy·4-Nitro-5-Sulfophenyl)-5-(PhXTT甲基四氮盐enylami

5、no)CarbonylFLUFluconazole氟康唑(抗真菌药物)q-PCRReal-timeQuantitativePCR实时定量PCRSDS．PApolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶GEWesternblot蛋白免疫印迹CLSIClinicalandLaboratoryStandardsInstitutedocument临床和实验室标准协会文M27A3M27．A3件M27．A3NationalCommitteeforClinicalLaboratory美国临床实验室标准化NCCLSStandards委员会万方

6、数据南京医科大学硕士学位论文法尼醇对白念珠菌cAMP．PKA信号通路作用的研究中文摘要目的：白念珠菌耐药现象出现而导致念珠菌感染下降的治愈率引起越来越多人们的关注，而法尼醇可以增加多种微生物对药物的易感性。本研究探讨法尼醇对白念珠菌浮游状态和生物被膜状态对氟康唑药物的易感性影响；通过构建白念珠菌耐药株阐明法尼醇对白念珠菌标准株及耐药株生物被膜状态c。心佃．PKA信号通路的调控作用及其与耐药的相关性。方法：实验一：实验分为法尼醇处理白念珠菌浮游组，生物被膜组以及各自法尼醇未处理对照组。采用XTT检测吸光光度值大小从而分析法尼醇处理对白念珠菌浮游状态和生物被膜状

7、态对氟康唑药物易感性的差异。实验二：研究菌株为：白念珠菌标准株及利用白念珠菌标准株诱导的白念珠菌耐药株。实验分组如下：法尼醇处理白念珠菌标准株生物被膜，法尼醇未处理白念珠菌标准株生物被膜，法尼醇处理白念珠菌耐药株生物被膜及法尼醇未处理白念珠菌耐药株生物被膜组。提取白念珠菌生物被膜全RNA，实时荧光定量PCR(q-PCR)检测法尼醇对白念珠菌不同生物被膜时相cAMP．PKA信号通路相关基因Rasl，Gpa2,Capl，Sgtl，Cyrl，Pdel，Pde2,Pkal，Bcyl，劢k2,砺J『表达的调控作用；提取白念珠菌生物被膜蛋白质，蛋白免疫印迹法(Weste

8、rnblot)检测法尼醇对cAMP．PKA通路RAS