zebularine诱导人鼻咽癌细胞cne-2z中抑癌基因去甲基化及其可能机制的探讨

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1、广东医学院硕士学位论文Zebularine诱导人鼻咽癌细胞CNE-2Z中抑癌基因去甲基化及其可能机制的探讨姓名：石雄州申请学位级别：硕士专业：@指导教师：张月飞201005Zebularine诱导人鼻咽癌细胞CNE．2z中抑癌基因去甲基化及其可能机制的探讨中文摘要目的Zebul撕ne是DNA甲基转移酶抑制剂，能使因甲基化而失活的抑癌基因重新激活，进而抑制肿瘤的生长。本文以鼻咽癌CNE．2Z细胞株作为研究对象，采用不同浓度的Zebul耐ne作用于CNE．2z细胞，观察抑癌基因的表达及去甲基化情况，探讨其抗肿瘤效应及可能的机理，寻找鼻咽癌治疗的新靶点。方法用终浓

2、度为loo岬10l／L、250pmol／L、400pmol／L的zebul撕ne作用于鼻咽癌CNE．2Z细胞的处理组和不加药物的空白对照组，作用48h后，采用免疫印记(Westemblot)方法检测Zebul撕ne处理前后抑癌基因DAPKl蛋白水平表达情况；用实时荧光定量甲基化特异性PCR(Real-timequaIltitativeMethylation—specficPCR)法检测Zebul捌ne处理前后抑癌基因DAPKl基因去甲基化情况。结果(1)zebul撕ne对CNE．2Z细胞中DAPKl蛋白水平的影响Wstem．Blot分析CNE．2z细胞中DA

3、PKl蛋白水平表达，结果显示随着Zebularine作用浓度的增加，处理CNE一2Z细胞48h后，DAPKl蛋白表达逐渐增强。空白对照组和不同浓度Zebularine作用CNE．2Z细胞的处理组之间差异均有统计学意义(尸

4、index，MI)逐渐降低。空白对照组和不同浓度Zebul撕m作用CNE．2Z细胞的处理组之间差异均有统计学意义(尸<0．05)，不同浓度Zebularine作用CNE-2Z细胞的处理组之间差异也均有统计学意义(尸<0．05)结论Zebul撕ne可诱导鼻咽癌CNE．2Z细胞株中DAPKl基因表达增强，其机制可能为Zebularine使DAPKl基因去甲基化，从而重新表达，抑制鼻咽癌CNE．2Z细胞的增殖。关键词鼻咽癌；CNE．2z；zebularine；甲基化；DAPKl；2Thepossibilityandmechanismofup—regulationo

5、fTumorSuppressorGenesnormethylationinnasopharyngealcarcinomaCNE-2ZcellsbyZebularineAbstractobjective：Zebularineisa11inhibitorofDNAmethyltransferase；itmayreactiVatemethylatedalltioncogene，therefore，inhibitthe毋．o、Ⅳthofcancercells．1nthisstudy，theVariableconcentrationofZebularineV，alsa

6、ddedtoCNE-2Zcellforsucceedingexperimentst0detecteXpressionanddemethylationofTumorSuppressorGenes，exploremepossiblemechanisms，andsearchfornewtreatmerittargetofNPC．Methods：Thefinalcorlcentrationl00Ⅲnol／L、250pmol／L、400肛mol／LofZebularinewasaddedtoCNE-2Zcellsforsucceedingexperiments．The

7、controlsandnodmgsofCNE-2Zcells、ⅣerecultiVatedfor48h．TheproteinexpressionofDAPK1genewasdetectedbyWstem—Blot．ThemethylationstatusofDAPK1genew弱detectedbyQMSP．Results：(1)111ee疏ctofZebularineonexpressionofDAPK1proteinARerthce脏ctofzebul撕ne，theeXpressionofDAPKlgenebec锄estrongeratprotein．B

8、etweendi腧relnconcentration