mapkcytccaspase3在a2ar敲除新生鼠hibd凋亡中的作用

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1、温州医学院硕士学位论文p38MAPK、cytc、caspase3在A2AR敲除新生鼠川即凋亡中的研究研究生：任素伟导师：陈翔教授陈江帆教授王小同教授温州医学院温州浙江中文摘要目的：1．探讨p-p38EtuDK、胞浆cytc、活化caspase3在A2AR敲除新生小鼠缺氧缺血脑区不同时间的表达。2．探讨A2AR敲除对新生小鼠缺氧缺血性脑损伤的作用及意义。方法：采用改良Rice法建立新生小鼠缺氧缺血性脑损伤模型(hypoxia-ischemiabraindamage，HIBD)。A2A受体敲除(A2AR(一／一)，KO)及同期野生型(A2AR(+／+)，WT)C57／BL6新生小鼠

2、(7日龄)分别按照完全随机分组方法分成假手术组(Sham-operated，SKO，SWT)、模型组(Model，M：MK0，MWT)，M按HIBD后取标本时间不同分为造模后1d组(M1：MK01，MWTl)、3d组(M3：MK03，MWT3)、7d组(M7：MK07，MK07)，共8个小组，每小组8只(n=8)，共64只。于规定时间点处死、取脑组织固定、剪尾鉴定基因型，以皮层及海马CAl区作为研究脑区，采用TUNEL技术结合光镜观察HE染色及尼氏染色检测神经细胞凋亡，采用免疫组织化学法检测活化caspase3、胞浆cytc及p-P38MAPK表达。同时，A2A受体敲除(KO)

3、及同期野生型(WT)小鼠分别取假手术组(SKO，SWT，n=10)及模型组(Ⅷ(0，M，n=30)于HIBD后ld，同时进行新生鼠短期神经行为学评定。所有数据进行正态性检验，多组间的比较采用单因素方差分析，方差齐者用LSD检验，方差不齐者用Dunnett’T3检验，两独立样本间比较采用t检验，相关分析采用Pearson直线相关。结果：1．新生鼠短期神经评定行为学评定：造模后ld小鼠完成各反射的时间都明显长于假手术组小鼠(P<0．01)，MKO较MWT各反射完成的时间稍长：翻正反射(P

4、1)HE染色：S组：皮层、海马CAl区细胞排列整齐，结构完整，形态正常，温州医学院硕士学位论文细胞间质均匀。M组缺氧缺血侧皮层、海马CAl区神经细胞结构模糊、胞体肿胀、胞浆水肿，出现不同程度的核深染、细胞皱缩、空泡化，MKOI病变最为明显，敲除型小鼠较同一时间点野生型严重。(2)尼氏染色：S组：皮层、海马CAl区细胞丰富且排列整齐有序，问质均匀。M组可见神经细胞排列不规则，细胞稀疏，组织间隙明显增宽，敲除型较同一时间点野生型严重，其中，又以MKOI最为明显。3．TUNEL检测皮层、海马CAl区神经细胞凋亡假手术组皮层、海马CAl区均偶可见极少量TUNEL阳性细胞表达；HIBD后

5、皮层、海马CAl区阳性细胞表达均显著增加，以HIBD后1d最为明显，任一时间点间比较差异均有显著性(尺O．01)；HIBD后同一时间点A2AR敲除组缺氧缺血侧皮层、海马CAl区TUNEL阳性细胞表达均较野生型显著增加(尺0．01)。4．皮层、海马CAl区p-P38MAPK表达：假手术组皮层、海马CAl区均偶可见极少量p-P38MAPK表达。HIBD后，P—p38MAPK表达迅速增加，ld后达高峰，同一基因型模型组各时间点间比较均有显著差异(P

6、O．01)。5．皮层、海马CAl区胞浆cytc表达(1)皮层：假手术组偶可见少量胞浆cytc表达。HIBD后，表达迅速增加，ld后达高峰，随后逐渐降低，其中敲除型小鼠HIBD后任一时间点均较同基因型假手术组显著增加(尺O．01)，而野生型仅MWTI、MWT3相较SWT有显著差异(尺0．01)。HIBD后同一时间点，敲除型小鼠胞浆cytc表达多于野生型，其中HIBD后ld、3d两种基因型间有显著差异(P

7、HIBD后同一时间点，敲除型小鼠胞浆cytc表达多于野生型，其中HIBD后1d、3d两种基因型间有显著差异(尺0．01)。6．皮层、海马CAl区活化caspase3表达：假手术组均偶可见极少量活化caspase3表达，HIBD后，活化caspase3表达增加，ld后达高峰，至7d，相较对照组仍有显著差异(尺0．01)，模型组各时间点间比较，差异均有显著性(尺O．01)。敲除组小鼠活化caspase3表达均较同一时间点野生型小鼠显著增加(P