gf-β对白血病细胞株gli1 gli2表达的影响

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1、·中文论著摘要·TGF-13对白血病细胞株Gl-1、G1．2表达的影响目的Hedgehog(HH)信号转导通路广泛存在于胚胎发育不同组织及时期，是胚胎发育过程中的主要调节信号通路之一，在组织的损伤与修复中发挥着开启正常干细胞自我更新的功能。但唧信号转导通路过度激活却可诱使正常干细胞转化成癌干细胞，最终导致癌的发生。众多研究表明该通路与包括白血病在内的多种肿瘤性疾病相关，因此抑制该通路有可能成为肿瘤预防和治疗的新靶点。Gli作为转录因子，是腿信号转导通路的最后一个环节，其下游基因包括多种与细胞增生分

2、化相关的基因，可能是该通路导致肿瘤的关键因素。这些基因包括调节细胞增生和分化的基因，维持细胞生长的基因，促进细胞自我更新的基因，血管生成相关基因，上皮基质转化基因和侵袭基因。这些均提示该通路的活化可能不仅和肿瘤的发生相关，还与肿瘤的复发，转移相关。Gti分子本身与肿瘤细胞的发生发展并没有直接关系，但直接调控肿瘤细胞增殖、分化和转移的分子基因转录水平则受到HH信号通路调控。最近的研究倾向于其他途径对Gli的非经典激活，发现在有的肿瘤中存在由TG卜13信号通路介导的Gli的非经典激活。TGF—B作为细

3、胞因子，对白血病细胞可以有一系列的影响，包括抑制细胞增殖和诱导分化、改变粘附分子和细胞因子受体表达，以及诱导细胞凋亡等。TGF—Bl在TGF§家系中发现最早，且生物活性最强，在造血调控方面起重要作用。那么，在白血病中是否同样存在TGF一8信号通路对G1i的调控作用呢?本研究应用TG卜13作用于白血病HL一60和U937细胞株，检测HH通路中G1i1和Gli2的mRNA和蛋白表达的变化，并检测TNF-Q以及SIS3对删通路中Glil和Gli2的mRNA和蛋白表达的影响，从而证明在白血病HL-60和U

4、937细胞株中同样存在TGF-8信号通路对Gli的调控作用，为白血病发病机制的完善提供新的思路，为白血病的治疗提供新的靶点。．．L’—L乃~云1、TGF-B对HL一60和U937细胞株Glil、G1i2表达的影响(1)0．Olng／m1、0．1ng／ml、lng／ml和lOng／mlTGF一131分别作用于HL一60和U937细胞24h、48h和72h后，MTT法检测HL-60细胞和U937细胞的增殖情况。(2)5ng／mlTGF_Bl作用于HL一60细胞和U937细胞72h后，流式细胞仪检测细胞

5、凋亡情况。(3)用0．1ng／ml、lng／ml、lOng／mlTGF-B1分别作用于肌一60细胞和U937细胞，时间分别为6h、12h、24h。处理结束后收集细胞，提取mRNA，检测Glil和Gli2的表达。(4)5ng／mlTGF—pl、5ng／mlTGF一9i+5

6、IMSIS3分别作用于U937细胞24h。处理结束后收集细胞，提取mRNA和蛋白，检测Glil和Gli2的表达。(5)PCR反应判定HL-60细胞和U937细胞是否表达Ptch和Smo基因。(6)5uMSIS3作用于HL一60细胞

7、和U937细胞，时间分别为6h、12h、24h。处理结束后收集细胞，提取mRNA和蛋白，检测Glil和Gli2的表达。(7)对照组细胞在不含任何处理因素的1640培养液中培养。(8)ELISA法分别检测正常人血清、HL_60细胞和U937细胞培养上清TGF-61水平．2、TGF—B和TNF—Q协同作用于HL-60和U937细胞株对Glil、Gli2表达的影响(1)5ng／mlTNF-Q和0．Olng／ml、0．1ng／ml、lng／ml、lOng／m1TGF—B1分别作用于HL-60细胞和U937

8、细胞24h、48h和72h，MTT法检测HL-60细胞和U937细胞的增殖情况。(2)5ng／mITNF-Q+5ng／mlTGF一91作用于H卜60细胞和U937细胞72h，流式细胞仪检测细胞凋亡情况。(3)5ng／mITNF—Q作用于HL一60细胞和U937细胞24h。处理结束后收集细胞，提取蛋白，检测TGF—BRI和TGF—BRII蛋白表达。(4)5ng／m1TNF—a作用于HL-60细胞和U937细胞，作用时间分别为12h、24h、48h。处理结束后收集细胞，提取mRNA，检测G1iI和G1

9、i2的表达。(5)5ng／mlTGF-Bl+5ng／mlTNF-Q、5ng／mlTGF—pl+5ng／mlTNF—fit+5laMSIS3分别作用于HL一60细胞24h；5ng／mlTGF一13l、5ng／mlTGF一$l+5ng／mlTNF—a、25ng／mlTGF-81+5pMSIS3和5ng／mlTGF一9l+5ng／miTNF一Ⅱ+5laMSIS3分别作用于U937细胞24h。处理结束后收集细胞，提取mRNA和蛋白，检测Glil和Gli2的表达。(6)对照组细胞在不含任何处