高、低剂量率γ线照射对哺乳类细胞生长存活及dna损伤修复的影响

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1、苏州大学硕士学位论文高、低剂量率γ线照射对哺乳类细胞生长存活及DNA损伤修复的影响姓名：曹丽丽申请学位级别：硕士专业：放射医学指导教师：周新文201110高、低剂量率7线照射对哺乳类细胞的生长存活及DNA损伤修复的影响中文摘要中文摘要目的：通过高剂量率(high—dose．rate，oracute，1．0Gy／min)、低剂量率(10w-doserate，orchronic，0．347mGy／min)丫线对哺乳类细胞的照射，研究照射后哺乳类细胞的生长存活情况，探讨丫线引起的细胞损伤修复机制。方法：(1)采用WesternBlot方法从蛋白水平检测DNA损伤调控因子P53、P21、

2、磷酸化共济失调一毛细血管扩张症致病基因(Ataxia-Telangiectasiamutated，ATM)在本研究所用细胞中的表达，为下一步研究提供可行性。(2)血细胞计数板计数法测定低剂量率照射对细胞生长曲线的影响；克隆形成率测定指数增长期及密集抑制期细胞高、低剂量率照射下的存活率。(3)采用免疫荧光染色法检测有无ATM抑制剂及DNA依赖性蛋白激(DNA—dependentproteinkinase，catalyticsubunit，DNA-PKcs)抑制剂作用于密集抑制的稳相细胞照射后DNA双链断裂(DNAdouble．strandbreaks，DSBs)的生物标记物丫．H2

3、AX的免疫荧光表达。结果：1、WesternBlot结果显示：高剂量率(1．0Gy／min)5．0Gy照射后，三种哺乳类细胞中，磷酸化ATM均有表达，磷酸化P53、P21也有一定程度的诱导表达。2、低剂量率照射组的HE．4细胞及MRC5．hTERT细胞相比较与未照射组生长速度减慢，而C3HlOTl／2细胞没有明显变化；3、指数增长期期细胞及密集抑制状态下高剂量率(1．0Gy／min)照射的细胞存活率均低于低剂量率(0．347mGy／min)照射。4、高剂量率(1．0Gy／min)T线照射密集抑制的稳相细胞后，随着培养时间的延长，细胞的存活率增高。5、-f．H2AX免疫荧光染色提示

4、ATM抑制剂及DNA．PKcs抑制剂处理后的密集中文摘要高、低剂量率T线照射对哺乳类细胞的生长存活及DNA损伤修复的影响抑制状态的细胞在高、低剂量率照射下的DSBs均高于对照组。结论：1、磷酸化ATM、磷酸化P53、P21在照射后的细胞中均有表达。2、高剂量率与低剂量率丫线对指数增长期及密集抑制状态下的细胞照射后，均存在明显的剂量依存关系；相同剂量照射，低剂量率照射下的细胞存活率显著高于高剂量率照射组。3、低剂量率丫线照射下细胞的生长速度减慢，以人纤维细胞最为明显。4、密集抑制的稳相细胞高剂量率丫线照射后存在潜在致死性损伤修复。5、ATM在高、低剂量率丫线照射诱导的DSBs修复中

5、均发挥重要作用。关键词：低剂量率；高剂量率；剂量依存关系；PLD；DSBs研究生：曹丽丽导师：周新文Ⅱ高、低剂量率T线照射对哺乳类细胞的生长存活及DNA损伤修复的影响英文摘要Comparisonofcellkillingeffectsbetweenlow-·doserateandhigh--dose—-rate?-raysandrepairof7·-rayinducedDNAdamage—AbstractObjective：Toinvestigatetheeffectivenessofthehigh—dose—rate(oracute)andlow-dose-rate(orchr

6、onic)?-rayirradiationininducingcellkillingandgrowthinhibitioninculturedmammaliancells，andthemechanismofrepairtheDNAdouble—strandbreaks(DSBs)．Methods：(1)TheproteinexpressionofphosphorylatedATM，P53andP21after?-irradiationinthreekindsmammaliancellswasanalyzedbywesternblothybridizationusingwellch

7、aracterizedmonoclonalantibodies．(2)Todeterminethereductionofbiologicaleffects，whichcellmaintainednotonlyinexponentiallygrowingconditionbutalsoindensity-inhibitedplateauphase，usingcolonyformationassay．(3)Usingthe7-H2AXassay,whichreflectsthepre