个侵染浙贝母的马铃薯y病毒属新成员——浙贝母花叶病毒的鉴定

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1、浙江大学博士学位论文摘要浙江省宁波市和磐安县栽培的浙贝母(Fritillariathunbe删fMiq，Thunbergfritillary)植株表现花叶或斑驳症状。用略作修改的常规线状病毒提提方法从病叶中提取出一种线状病毒，经过一系列鉴定，确定为马铃薯Y病毒属的一个新种，暂命名为浙贝母花叶病毒(Thunbergfritillarymosaicvims，TFMV)。该病毒粒子长约750nln，直径12，13am，略弯曲。病叶细胞质中含有马铃薯Y病毒属成员特异的柱状(风轮状)内含体和长的簿片状聚集体。用SDS．PAGE方法确定该病毒CP的相对分子质量为32kDa。除浙贝母外，摩

2、擦接种该病毒于17种广泛应用的指示植物均不表现症状。该病毒CP与26种来自5个不同属病毒的cP无血清学关系。Westernblot、对流免疫电泳和火箭免疫电泳可以定性检测病叶中的浙贝母花叶病毒，而免疫扩散和ELISA方法不适合该病毒的检测。分别测定了浙贝母花叶病毒宁波和磐安分离物的基因组全序列。宁波分离物f序列登录号AJ851866)和磐安分离物(序列登录号AJ885005)的基因组均由9723个核苷酸组成(不包括potyA尾)，均具有单一开读框。二者全序列高度同源，全序列核苷酸同一性为98．1％，多聚蛋白氨基酸序列同一性为98．O％，可以肯定两个分离物属同一种病毒。计算机分

3、析揭示，二者有相同的基因组结构，开读框均起始于第107．109位的第一个AUG起始密码子，均终止于第9494·9496位UGA终止密码子，均编码一个由3129个氨基酸组成的的多聚蛋白，相对分子质量为354．4kDa，3’-NTR长224个核苷酸。TFMV萋霞缝结构爨有典黧兹马铃薯Y病毒嚣袋受懿基鏊缝结较特搓，它的多聚蛋白裂解位点分别是IKEF／S(P1／HC．Pro)、YRVG／G(HC．Pro／P3)、YIFQ／A(P3／6K1)、MKI塞_Q／S(6K1／CI)、LH_FQfS(CI／6K2)、YSFQ／A(6K2／NIa-VPg)、LVEE／S(NIa-VPg／NIa-

4、Pro)、WNFQ／A(Nh—Pro／N／b)和FCF_Q／A(NIhlCP)。推测的CP由269个氨基羧组成，相对分子震爨免30．7kDa+与SDS．PAGE溺宠豹结荣耀骰。用TFMV基因组全序列与39种其他马铃薯Y病毒属成员的象序列避行同～住院鞍和系统迸纯树分轿。TFMV与露合斑驳瘸毒(Lilymottlevirus．LMoV)在6KI、VPg和NIb区域擞相似，全长多聚蛋白氨基酸序列的BLAST搜索显示LMoV与TFMV蓑系最近，两誉ORF氨基酸序列间一往＆53．O％，核游酸序梦fj同一性为56．7％。全长多聚蛋囱氨基黢序列系统进化树分析揭示TFMV与韭葱黄条病毒(Le

5、ekyeltowstripevirus，LYSV)、LMoV、蘩豆黄花叶病薄(Beanyellowmosaicvwus，BYMV)和三时孳黄脉瘸毒(Cloveryellowveinvirus．CIYVV)具有嗡箍的成簇关系，特剐与LYSV成簇明显。LYSV秘LMoV同样侵染西合科单子叶球茎植物。将TFMV与82种马铃薯Y病毒耩和黑麦草花叶病毒属成员基因缀3"-末端编码序列(部分NIb和全长CP慕因)进季亍系统进化树分析。结果表明TFMV与嚣蒜轻斑驳病毒(Lycoris州fldmottlevirus，LyMMoV，AF399672)关系较近，二者3'-寒端廖列核替酸同一性为69

6、，1％，CP基因核麓酸序列网一性为72．8％。浙江大学博士学位论文国簖瘸毒分类委员会给予的马铃薯Y病毒属成员分类标准中包括CP氨攮酸痔列鼷～瞧小予80％秘基因缓全黟剜孩萤酸澎刘嚣一茬小予85％03erger簿，2004)。激近的研究猜承全长开读稚藏cP基因核稽酸序歹日同一性小于76％是该属不同种最适宜分类分予标准(Adams等，2005)。TFMV显然符合该属不同种的序列分类标准(与所肖已知序列病凑比较，全长开读框核苷酸_

7、葶列同一性《57％，cP基嚣梭蕾酸痔歹《藏一往<73争罅，劳量其蠢不弱蕊簧逶生携攀耪盎瀵学特靛。关键词：马铃薯Y病毒属；浙贝母花叶病毒；缩构基因组学；分子

8、鉴定；分类浙江大学博士学位论文ABSTRACTSomeplantsofThunbergfrifillarygrowninNingboandPanan，Zhejiangprovinceshowtypicalmosaicandmottlesymptoms．AfilamentousviruswaspurifiedfromtheinfectedleavesusingamethoddescribedbyCheneta1．n989)withsomemodification．Byaseriesofidentity,i