甘蓝型油菜紫叶基因bnaa.pl1定位和候选基因分析

《甘蓝型油菜紫叶基因bnaa.pl1定位和候选基因分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、华中农业人学2015届博土研究生学位(毕业)论文2．2试验方法．．242．2．1遗传群体的构建242．2．2紫叶性状植物学表型观察及花色苷显微定位252．2．3叶绿素的提取和比较252．2．4花色苷的提取和比较262，2．5紫叶性状对光合作用的影响262．2．6分子标记方法282．2．7AFLP多态性标记的T-A克隆302．2．8SNP：芭：片结合BSA法开发标记．312．2．9分子标记的开发322．2．10连锁图的构建．322．2．11半定量和定量PCR322．2．12BnaA．儿，序列分析342．2．13转录

2、组测序分析．343结果与分析．393．16—1029全生育期紫叶性状观察．．393,2紫叶突变体叶片观察及花色苷组织定位一403．3叶绿素和花色苷含量的比较一4l3．4紫叶性状对光合作用的影响．．423．4．1光响应曲线分析423．4．2C02响应曲线分析443．5紫叶遗传规律确定一473．6紫叶基因BnaA．PLl的定位483．6．1SSR及AFLP标记的筛选483．6．2SNP芯片多态性标记的筛选503．6．3其它紫叶基因连锁标记的筛选533．6．4BnaA．PLl基因的遗传定位．543．7半定量和定量PCR

3、．583．7．1半定量PCR．．58II万方数据"蓝型油菜紫叶BnaAPLl基因定位及候选基因分析3．7．2定量PCR593．8候选基因在突变体和野生型之问的比较测序与分析．603．9紫叶突变体的转录组分析．633．9．1测序数据质量评估．．633．9．2Reads与参考基因组比对643．9．3RNA—seq整体质量评估一643．9．46—1029中与拟南芥花色苷合成基因同源基因的差异表达分析．．724讨论．．834．1白菜基因组与甘蓝型油菜A染色体组的共线性834．2SNP结合BSA在甘蓝型油菜定位的优势834

4、．3BnaA．PLl是不同于Bra017728和Bra017831的基因844．4花色苷合成与硫代谢的关系844．5紫叶突变体在育种中应用．864．6下一步计划．87参考文献89致谢．100附录l一102附录2．．103IlI万方数据甘蓝型油菜紫叶BnaA．PLI基网定位及候选基因分析摘要甘蓝型油菜紫叶性状是由于花色苷在叶片中的积累所产生的形态学变异。紫叶除可作为一种重要的指示性状运用于杂交制种外，其所富含的花色苷具有光保护、耐干旱、耐寒、减少病虫害以及抗氧化、抗肿瘤、改善心血管等诸多的生物学保健功能。正因如此，

5、与花色苷相关的性状成为近年来的研究热点之一。本研究对甘蓝型油菜紫叶突变体(6．1029)进行了如r卜．研究：(1)全生育期表型观察、花色苷分布的解剖学观察；(2)利用紫叶突变体与绿叶野生型(6—1025)建立了定位群体和近等基因系(NIL)；(3)分析了6．1029、6．1025及其F1花色苷含量著异以及NIL中3种叶色(紫叶、浅紫叶、绿叶)单株叶绿素、花色苷含量、光合作用特性；(4)在利用定位群体分析紫叶性状遗传模式的基础上，依据公布的甘蓝型油菜和白菜基因组数据库对紫叶基因进行了精细定位；(5)在确定同源的甘蓝

6、型油菜和白菜候选区段后，进行了候选基因预测、候选基因表达量分析、候选基因比较测序以及NIL中3种叶色单株的转录组测序及花色苷相关基因表达量分析。本研究的结论如下：16-1029全生育期叶色形态学观察通过对6．1029全生育期的叶色形态学观察发现，6．1029的子叶在初生时呈绿色，6天后开始显浅紫色；6—1029的真叶在初生时呈绿色，生成3天后叶脉处开始显浅紫色；随着生长时间的延长，6—1029叶片紫色逐渐加深，第35天开始呈现典型的紫色性状；自抽薹期开始，6．1029叶片紫色开始变淡，至终花期完全恢复绿色。从上述

7、结果来看，6—1029的紫叶性状与其所处生长发育时期有关。26．1029花色苷分布的解剖学观察对6—1029和6。1025及两者杂交后代Fl叶片的显微观察发现，6．1029和F1叶片上表皮细胞均有花色苷分布，但Fl叶片中花色苷的密度要低于6—1029：6—1025叶片则没有花色苷分布。此结果与表型观察相符，即6—1029叶片正而呈紫色、F，叶片正面呈浅紫色、6．1025叶片为绿色。万方数据华中农业大学2015届博士研究生学位(毕业)论文3叶绿素和花色苷含量比较对6．1029、6．1025及Fl进行的花色苷含量分析

8、表明，6—1029花色苷含量(64．33±0．162mg／lOOg)，显著高于6-1025花色苷含量(7．73±0．088mg／1009)及F1花色苷含量(20．11±0．262mg／lOOg)。对于NIL紫叶、浅紫叶和绿叶单株的叶绿素和花色苷含量比较分析表明，3种叶色单株叶绿素a含量相同；叶绿素b和总叶绿素含量差异达到显著水平，其中绿叶单株叶绿素b(O．40+0．037