利用外显子组测序技术筛选肝内胆管癌突变基因及验证usp17基因

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1、解放军医学院研究生学位论文原创性声明秉承我院“忠诚、敬业、和谐、创新”的学风，本人声明：所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料，对本文的研究作出贡献的个人或集体，均已在文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：日期：洲，【，，夕指导教师签名：日期：州．g-．仔解放军医学院研究生学位论文版权使用授权书本人保证毕业离院后，发表论文或

2、使用论文工作成果时署名单位为解放军医学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原件、复印件和电子版本，可以采用影印、缩印、扫描或其它手段保存论文以供被查阅和借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)。论文作者签名：李昊、日期：弘／‘万方数据解放军医学院硕士学位论文目录中文摘要．．1Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3前言5第一部分全外显子深度测序及数据分析71．材料与方法一72．结果．．153．小结．20第二部分Sanger直接测序对结果验证．211．材料与方法212．结果．．2s3．

3、硝、结．．．．．27第三部分免疫组化探究蛋白水平变化．291．材料与方法292．结果一312．／J、结．．32讨论33参考文献．35文献综述：肝内胆管癌分子发病机制的研究进展39中英文对照缩略词表54攻读学位期间公开发表的论文．．54致谢55万方数据解放军医学院硕士学位论文利用外显子组测序技术筛选肝内胆管癌突变基因及验证USPl7基因中文摘要目的：利用深度测序技术探究肿瘤形成过程中相关的遗传改变，希望找到与肝内胆管癌形成和进展相关的体细胞突变基因，为研究肝内胆管癌病因，探寻合适的肿瘤诊断标记物及治疗靶点提供更多理论依据。方法：①收集中国人民解放军总医院肝胆外科201

4、4年5月至2014年12月经手术治疗的5例肝内胆管癌患者癌组织及相应癌旁组织，进行外显子组捕获测序，经生物信息学分析后挑选出候选基因。②收集来自中国人民解放军总医院肝胆外科2014年5月。2015年9月的肝内胆管癌手术切除49例癌组织以及对应癌旁肝组织(含以上高通量测序标本)，其中肝外转移组15例，非转移组34例。设计引物，PCR扩增目的片段后进行Sanger测序，验证深度测序结果，比较转移组与非转移组中目的基因突变率差异。③采集中国人民解放军总医院病理科保存的2015年9月至2016年1月肝内胆管癌术后标本制成的蜡块，癌组织及对应癌旁组织各36例。采用免疫组化的方

5、法观察USPl7蛋白表达水平在癌组织与癌旁组织，及癌组织转移组与非转移组当中的差异。结果：经过对5对样本的深度测序及生物信息学分析，筛选出USPl7LIO、SPDYEl、LRRC37A3、SIMCl、TPSDI、PRAMEFl8、TBCID3G、OBSCN等在肝内胆管癌中新发现的8个基因的12个SNV位点作为候选突变基因位点。扩大样苯量行Sanger测序发现在49例肝内胆管癌组织DNA中发现7例发生了与深度测序突变位点相同的USPl7LIO点突变，突变频率为14．3％，即在4号染色体基因组9213473位置(该基因序列1091位置，NM001256852．1)发生G

6、>C点突变，为错义突变，AGT-◆ACT，丝氨酸变为苏氨酸，杂合子突变型。癌旁组织未见该突变。7例突变标本中5例发生在15例转移组中(33．3％)，2例发生在34非转移组中(5．9％)，转移组与非转移组的突变率有统计学显著性差异(P<0．05)。免疫组化显示36例肝内胆管癌组织中存在16侧USPl7阳性(44．4％)，36例癌旁组织中5例阳性(13．9％)，万方数据解放军医学院硕士学位论文且两者阳性率有统计学显著性差异(P<0．05)。16例阳性癌组织中，6例属转移组，10例为非转移组，两者阳性率差异无统计学意义(胗0．05)。结论：USPl7基因突变可能与肝内胆管

7、癌发生发展相关，并与肿瘤的肝外转移关联。USPl7蛋白在癌组织中的表达水平高于癌旁组织。嬲PJ7基因突变在肝内胆管癌中的作用机制尚有待进一步深入研究。【关键词】肝内胆管癌：深度测序；全外显子组：基因突变：Sanger测序：USPl72万方数据解放军医学院硕士学位论文DeepSequencingIdentifiesMutationGenesRelatedtoIntrahepaticCholangiocarcinomaandVaHdationoftheUSPl7MutationAbstractObjective：Toinvestigatecandidategenes