镧对lps激活血管内皮细胞nf

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1、摘要摘要目的：本研究以内毒素(LPS)激活人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放炎症因子为模型，探索氯化镧(LaCl3)对血管内皮细胞NF．rd3．Jmjd3信号轴的影响，并分析其可能的表观遗传学调控机制，为有效抑制血管炎症反应，开发稀土药用价值提供实验依据。方法：1、细胞培养及分组：复苏并常规培养原代HUVECs，将处于对数生长期的HUVECs随机分为空白对照组(control：给予无血清培养基培养2h)、LPS组(以含1“g／mlLPS的无血清培养基培养2h)、LaCl3组(以含2．5pM／mlLaC

2、l3无血清培养基孵育细胞2h)及LPS+LaCl3组(以含2．59M／mlLaCl3无血清培养基预处理细胞30min后，更换含1“g／mlLPS无血清培养基继续作用细胞2h)。2、MTT法检测LaCl3对HUVECs细胞活力的影响。3、分离HUVECs胞浆及胞核蛋白，蛋白质印迹法检测NF．1cB信号系统相关蛋白表达水平。4、Millipore转录因子试剂盒检测胞核提取物中NF．rd3／p65蛋白与靶序列的结合活性。5、采用实时定量PCR及蛋白质印迹法从mRNA及蛋白质水平检测HUVECs中Jmjd3的表

3、达量。6、应用Millipore染色质免疫共沉淀试剂盒建立NF-r．_B／p65、Jmjd3及H3K27me3关联的DNA文库，结合实时定量PCR分析在目标基因TNF．0【、MMP．9、IL一6、IL．邛、COX．2及ICAM．1转录起始结合位点NF-r．_B／p65、Jmjd3、H3K27me3的富集变化。7、采用实时定量PCR法及ELISA试剂盒分别检测细胞中TNF．0【、MMP．9、IL一6、IL．1p及ICAM．1炎性基因的表达水平及其在细胞上清液中浓度的变化。结果：1、LaCl3对HUVECs

4、活力的影响：与对照组比较，当LaCl3浓度为2．5、5．0、25、50、1009mol／L时HUVECs的生长情况无明显差异，当作用浓度为200pmol万方数据摘要时，HUVECs的生长出现抑制现象(与对照组相比P<0．05)，实验浓度(2．59mol／L)的LaCl3对HUVECs未体现出毒性作用。2、LaCl3抑制LPS诱导HUVECsNF．vd3．JIIljd3表达上调：(1)Westem．Blot结果示，与对照组相比，LPS组胞核NF．r,B／p65表达水平明显升高，而LPS+LaCl3组贝I显

5、著下调，LaCl3组NF．rd3／p65表达水平变化不明显；Ir．Ba的表达量在对照组为最高，其次是LaCl3组，表达略有下调，而在LPS组则出现显著下调，Iv,t3a的表达量在LPS+LaCl3组则低于LaCl3组，但与LPS组相比无明显变化。(2)Jmjd3的表达与活性：RT-qPCR与Westem．Blot结果基本一致，相对于对照组，LPS组Jmjd3基因表达水平提高，LPS+LaCl3组则显著下降，差异具有统计学意义(P<0．01)，而LaCl3组无明显差异。3、LaCl3对HUVECs中NF．

6、rd3；／p65与其下游靶序列结合活性的影响：LPS作用于HUVECs后，NF．r,B／p65结合DNA的活性显著高于对照组(P

7、有统计学意义(P

8、集量无显著差异，在MMP．9基因启动子区的募集量则显著下降(P