奥尼罗非鱼无乳链球菌的鉴定及免疫预防的初步分析

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1、奥尼罗非鱼无乳链球菌的鉴定及免疫预防的初步研究摘要2009年海南地区鱼类链球菌病的发病率高达50％，死亡率在30％以上。2009年8月从海南省几个罗非鱼养殖场患病的奥尼罗非鱼(OreochrommaureusxOreochromisniloticus)中，分离到5株分别编号为LFY-08．23、LFY-08．23．2、LFY-08．23．3、LFY-08．23-4、LFY-08．23．5的菌株。经过对5株分离菌株进行生理生化特性鉴定、Biolog系统鉴定以及利用原核生物16SrRNA基因通用引物进行16S

2、rRNA基因的克隆及序列分析，结果发现这5株菌株与无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)的生理生化特性相似，LFY-08．23的16SrRNA基因克隆及序列分析结果与＆agalactiae(EF092913，DQ303183，AF459432)自然构成一个分支，相似性高达99．8％。因此可以确定&agalactiae是海南罗非鱼链球菌病的主要病原。用分离的＆agalactiaeLFY．08—23菌株对1009左右和309左右的斑点叉尾鲴进行人工感染试验，结果表明该菌株对斑点叉尾鲴具有

3、较强的致病力。分离到的&agalactiae菌株对头孢氨噻肟、丙氟哌酸、利福平等13种药物高度敏感，对呋喃妥因、新生霉素、强力霉素等7种药物中度敏感，对卡那霉素、链霉素、磺胺异恶唑等5种药物不敏感。本文将无乳链球菌的苯酚灭活苗(P．SA)、胞外产物优化灭活疫苗(ECP-modifiedbacterin)作为免疫原，分别接种斑点叉尾鲴(Ictaluruspunctatus)后，通过测定受免斑点叉尾鲴的凝集抗体效价、溶菌酶活性、血液白细胞吞噬活性以及活菌攻毒的方法，比较了斑点叉尾鲴对2种不同＆agalacti

4、ae疫苗的免疫应答。结果表明，对斑点叉尾鲴腹腔注射接种2种不同疫苗，与对照组相比，均能刺激受免斑点叉尾鲴较强的免疫应答，不同程度的提高了血清中凝集抗体效价、溶菌酶活性、血液白细胞吞噬活性。活菌攻毒后，对照组全部死亡，而两个免疫组均获得了不同程度的免疫保护率(RPS)，胞外产物优化灭活疫苗组(ECP-modifledbacterin)为70．O％，而单纯的苯酚灭活疫苗组(P．SA)为66．6％。关键词：奥尼罗非鱼；无乳链球菌；鉴定；斑点叉尾锢；灭活疫苗；胞外产物优化灭活疫苗；免疫应答华中农业大学2010届硕

5、士研究生学位论文Abs仃actThedominantbacterialstrain，designatedasLFY．08-23，LFY-08-23—2，LFY-08—23-3，LFY-08—23-4，LFY-08·23-5，wasisolatedfromthediseasedHybridTilapia(OreochromisaureusxOreochromisniloticus)inHainaa．nlebiochemicalandphysiologicalcharacteristicsoftheisola

6、teswereleamdbyusingconventionalmethodandBiologSystem．ThetestshowedthattheisolateswereGram—positivecocciarranginginchains，catalasenegabive，13-haemolyticon5％sheepbloodagarandserogroupB．Accordingtotheir16SrRNAgenesequenceandmolecularphylogeneticdendrogram，th

7、eLFY-08-23WasmostclosetoStrptococcusagalactiaewitllasimilarityof99．8％．Thevirulenttestwerecarridedoutbyusingthepurecultureofthebacteriaartificiallyinfectedlctaluruspunctatus，weightof1009and309，theconsultshowedthatLFY-08-23havehighvirulent．Themorphologicala

8、ndbiochemicalcharacteristicsofthere—isolatedbacteriafromtheartificiallyinfecteddiseasedfishwerethesameasthoseoftheoriginalinfectedbacteria．ThesusceptibilitytesttoantibioticsdemonstratedthattheisolatestrainLFY008—23W