frat1在非小细胞肺癌中的表达及其与βcatenin tcf4相关性的分析

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1、优秀毕业论文·中文论著摘要·Fratl在非小细胞肺癌中的表达及其与p—catenin、TCF一4相关性的研究刖吾研究证明：Frat(frequentlyrearrangedinadvancedT-celllymphomas)是Wnt信号传导途径的正向调节因子【l】，通过与糖原合成酶激酶3(GSK3)结合，抑制GSK3依赖的磷酸化作用，从而使B．catenin水平升高【2l，B．catenin通过与TCF4结合而激活靶基因。目前，已有研究报道FRATl在一些恶性肿瘤中有过表达口'5’71，但是其过表达是否与肿瘤的临床病理因素有关尚不清楚，在肿瘤组织

2、中Fratl过表达与13．eatenin表达的关系是否与细胞系当中所获得的结果一致也未见报道。因此我们选择了137例肺癌手术患者的标本(其中78例有随访资料，59例有淋巴结转移灶标本)对Fratl的表达与B．catenin、TCF4表达的关系进行探讨，以明确在肺癌组织中的表达情况和与临床病理因素之间可能的关系。材料与方法1、材料137例原发性肺癌患者的术后组织标本收集自中国医科大学附属第一医院病理科1998．2005年存档蜡块。男性89例，女性48例，男女性别比1．8：1。年龄33～76岁(中位年龄58岁)。按UICC(2002)肿瘤TNM分期标

3、准：I期34例，lI期37例，III期61例，lv期5例。按WHO(2004)肺癌分类标准，鳞状细胞癌63例，腺癌74例。高分化30例，中分化74例，低分化33例。对其中59例肺癌患者的原发灶及淋巴结转移灶组织标本对比分析。对其中78例进行了术后随访，随访日期计算从手术R起，到因复发／转移而死亡或随访截止日期为止，截止日期为2007年8月25日。所有病例术前均未接受放、化疗。精品参考文献资料优秀毕业论文2、免疫组织化学染色组织经中性福尔马林固定、石蜡包埋，制成4um连续切片。切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化后行LSAB法免疫组化染色。～抗为羊抗鼠F

4、ratl多克隆抗体(SantaCruzBiotechnology，SantaCruz，CA，USAl：50)、鼠抗人B．catenin单克隆抗体(即用型，购自福州迈新生物技术公司)和鼠抗人TCF4多克隆抗体(SantaCruzBiotechnology,SantaCruz，CA，USAl：100)。生物素标记的二抗(MB一9207，MaixinBiotechnology,Fuzhou，China)为即用型。3，3’．二氨基联苯胺(DAB)进行显色。以磷酸盐缓冲液(PhosphateBufferSaline，PBS)代替一抗作为阴性对照。SP超敏免

5、疫组织化学试剂盒和DAB酶底物显色试剂盒购自福州迈新生物技术公司。3、结果判定选肿瘤细胞阳性染色集中区域，每张切片计数400个癌细胞，由两名病理医师双盲观测。Fratl评分标准：在正常的肺泡上皮及支气管上皮为阴性表达，阳性细胞≤10％为阴性表达；>／11％为阳性表达。13-catenin评分标准参考xu等标准【4】=正常上皮组织中阳性表达并定位于细胞膜，阳性细胞数>90％。阳性瘤细胞数≤90％为表达降低，10％以上瘤细胞核／浆表达为异位表达，异位表达和表达降低统归为异常表达。TCF4判定标准与Fratl评分标准相同。4、细胞培养人类肺癌细胞系A5

6、49、LTE、661、460、BEI培养于含10％灭活胎牛血清、2．39／LNaHC03、100units／ml青链霉素的RPMll640(Invitrogen，美国)培养液中，贴壁生长，每2天用0．25％胰酶(Invitrogen)消化传代。5、Transwell用无血清的RPMll640培养液将细胞浓度调整至5x106个／ml，取lOOpk细胞悬液滴入上室内(5x105个细胞)，下室加入含有10％胎牛血清的RPMI1640培养液，上下室之间用孔径为81Jm的聚碳酸酯微孔滤膜(Corning，美国)分开，将小室置37。C，5％C02条件下分别放

7、置6，12，18h后，弃去上室内液体，擦尽膜上Matrigel胶，100％甲醇固定30分钟，常规苏木素染色，光镜下计数细胞数。2精品参考文献资料优秀毕业论文6、统计学分析应用SPSSforWindows14．0统计分析软件进行数据处理。免疫组化结果采用Z2检验，Spearman等级相关分析，Kaplan-Meier法，Log-Rank检验。细胞系实验结果采用t检验，P

8、要表达在细胞浆，为弥漫分布，偶见胞核／胞浆阳性。阳性表达率为62．0％(85／137)。中分化(25／36，73．5％)、低分化(23／