细胞核中β-catenin和nanong在非小细胞肺癌中的表达及预后相关分析

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1、南方医科大学2010级博士学位论文细胞核中13l-catenin和Nanog在非小细胞肺癌中的表达及预后相关分析Nuclear13l-cateninaccumulationisassociatedwithincreased●⋯·■ooo·’■’exoreSslonotNanog聊∞怃mandpredictspoorprognosisOI．一I一non-smallcelllungcancer课题来源：国家973课题学位申请人李锡清导师姓名肖广惠专业名称肿瘤学培养类型专业型培养层次博士研究生所在学院基础医学院2013年4月10日广州．f㈣细胞核中13-catenin和Nanog在非小细

2、胞肺癌中的表达及预后相关分析中文摘要背景13-catenin在细胞的细胞膜、细胞质和细胞核三个部位均有表达，在细胞膜上作为细胞骨架蛋白主要介导细胞间的黏附，在细胞质中13-catenin作为Wnt信号通路中重要的信号传递下游蛋白，参与多种基因的表达调控，在细胞核中转录异常可使靶基因表达上调，直接激活相关基因转录，促进细胞的恶性转化和肿瘤的产生。Nanog基因在维持干性(stemness)，既细胞自我更新和保持全能性中发挥重要作用，促进肿瘤的增生、侵袭和转移，能增加肿瘤的恶性程度。目前13-catenin在肺癌临床标本中的研究较少，大多研究对其表达未做深入具体的研究，对13-cate

3、nin在tH,细胞肺癌(NSCLC)细胞上分布的位置，对预后产生的影响均有争议，其是13-catenin和Nanog在肺癌患者上的表达的关系目前尚未有人报道。目的本研究观察干细胞相关基因13-catenin和Nanog在tH,细胞肺癌的临床病理及预后中的意义，明确13-catenin在非小细胞肺癌细胞上分布的位置对肿瘤的恶性程度和病情进展的影响，从位于细胞膜、细胞质和细胞核上三种不同位置的13-catenin对临床预后的的影响作一探讨，分析Nanog的表达是否与13-catenin的表达存在相关性，并分析Nanog在Wnt／13．catenin通路中的受到的调控和其作用机制，探讨1

4、3-catenin和Nanog基因导致的肿瘤恶性程度增高的机制。因此，本研究不仅从临床患者组织水平，而且从体外细胞水平不同角度，研究13-catenin和Nanog蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其意义；体外研究主要通过基因敲除和过表达技术，沉默或者过表达p-catenin和Nanog基因，观察这两种摘要基因对非小细胞肺癌细胞A549和H23的增殖、干细胞属性、药物耐受，及对裸鼠成瘤能力的影响。并进一步探讨其可能的作用机制，通过使用EGF刺激A549和H23细胞后使用蛋白印迹和免疫荧光技术观察对13-catenin和Nanog的影响，并分析二者之间存在的调控关系，明确使用EGF

5、刺激后对细胞内处于细胞膜、细胞质和细胞核13-catenin影响的特点，尤其是13-catenin敲除的情况下使用EGF刺激是否对Nanog的表达产生的影响，研究13-catenin和Nanog基因与非小细胞肺癌发生和发展的分子机制，为13-catenin和Nanog成为tN,细胞肺癌临床诊断参考指标和基因靶向治疗的新靶点等方面提供理论依据。方法1．收集湖南省肿瘤医院2001年2月至2005年lO月手术确诊的初治的，早期和中期的4H,细胞肺癌患者213例，桂林医学院附属医院2002年1月至2006年4月手术确诊的初治的，早期和中期的非小细胞肺癌患者96例，采用免疫组化二步法检NtH

6、,细胞肺癌组织13-catenin及Nanog的表达情况。2．回顾性分析tH,细胞肺癌术后309例患者临床资料，根据病理或随访结果，使用SPSS统计分析lB-catenin及Nanog的表达与临床病理参数的关系及对生存期产生的影响。3．分析13-catenine及Nanog基因在非小细胞肺癌组织标本中的表达相关性。4．对过表达fl-catenin和Nanog基因的A549和H23细胞，进行干细胞富集的肿瘤球培养，比较各组间的差异以确定干细胞基因对肺癌细胞肿瘤球形成的影响。5．13-catenin和Nanog基因对肺癌细胞的侧群细胞(SP)比例的影响，分析两种基因对自我更新、分化的影

7、响特。6．使用EGF刺激A549细胞和H23细胞后，用免疫荧光技术观察细胞内的ftcatenin和Nanog的表达发生的变化，明确13-catenin发生变化后对Nanog发生的影响。II博士学位论文7．使用EGF刺激A549细胞和H23细胞后，用蛋白印迹技术分析细胞核和细胞质中的13-catenin的表达特点，EGF对细胞的影响部位。8．通过基因敲除技术沉默13-catenin的表达后，观察对Nanog表达的影响，并且对沉默13-catenin的A549和H23细胞