第三方淋巴细胞主动免疫治疗不明原因复发性流产的可行性研究

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1、第三方淋巴细胞主动免疫治疗不明原因复发性流产的可行性研究摘要：日的：寻求一种新的不明原因复发性流产的有效治疗方法。方法：以采用丈夫以外的健康男性（笫三方）外周血中淋巴细胞对患复发性流产女方进行主动免疫治疗为实验组，采用丈夫外周血中淋巴细胞进行主动免疫治疗为对照组，用相同的方法获得外周血淋巴细胞，通过对比两组患者的CD4+、CD25+、Tr表达率和妊娠成功率进行比较。结果：发现采用丈夫以外的男性（第三方）外周血（实验组）和采用丈夫外周血（对照组）治疗前后患者的CD4+、CD25+、Tr表达率Z间均存在显著差异（P0.05）。结论：采用丈夫以外的健康男性（第三方）外周血中淋巴细胞对患

2、复发性流产女方进行主动免疫治疗同样效果显著。基金项目：湖南省卫生计生委2015年度科研计划课题项目（编号B2015-159）；株洲市年度医疗卫生领域指导性计划（编号2014YW01）复发性流产（RSA）是指妊娠20周前连续自然流产3次及3次以上者,是临床上常见的妊娠并发症。在育龄妇女中的发病率约为1%〜5%［1］。引起复发性流产的因素很多，如遗传因素、子宫病变、内分泌失调、自身免疫性疾病等是较确定的原因［2］。另外，还有占50%左右的复发性流产，目前病因还没有明确，而其中40%〜60%原因不明的复发性流产是由免疫方面的因素引起的，其中封闭抗体不足就是导致复发性流产的关键免疫因素。

3、现今，选择淋巴细胞免疫治疗该疾病已经成为关注的焦点。通常是采用丈夫的外周血淋巴细胞进行主动免疫治疗，可以取得良好的疗效。然而,有时受女方丈夫患有传染性疾病或其他因素影响，丈夫外周血不能用时这一治疗方法就受到了限制。本研究主要是采用丈夫以外的健康男性（第三方）外周血中淋巴细胞对患复发性流产女方进行主动免疫治疗，与釆用丈夫外周血中淋巴细胞进行主动免疫治疗进行对比，观察其治疗效果。以寻求一种新的复发性流产的有效治疗方法。1资料与方法1.1研究对象选择在木院生殖中心门诊确诊的RSA患者114例，由于丈夫患有传染性疾病或其他因素影响只能采用丈夫以外的男性（笫三方）外周血的56例，作为观察组

4、。采用丈夫外周血的58例作为对照组。女方平均年龄29岁，平均自然流产5（3〜8）次，所有患者均符合以下条件：1）早期自然流产史$2次；2）抗体ASAb.EmAb、ACA等自身抗体均阴性；3）内分泌检查正常，无黄体功能不足；4）封闭抗体（BA）阴性；5）双方行TORCH、衣原体、支原体等检查均为阴性；6）夫妇双方无家族遗传病史；7）男方精液分析正常；8）治疗前3个月未经过任何免疫治疗；9）夫妻双方对淋巴细胞主动免疫疗法有充分的了解，并签署知情同意书，均排除生殖道畸形和形态学异常。供血者筛查：在进行主动免疫治疗前，对供血者进行常规检查，已排除疾病血行感染的潜在可能。同时对患者进行知情

5、谈话，告知主动免疫治疗存在的风险，签署知情同意书。1.2研究方法无菌条件下抽取患者丈夫或第三方男性外周血20niL,加入肝索钠10m、生理盐水10mL混匀，静置30min,经淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，然后吸取富含淋巴细胞的白膜层，加入适量生理盐水洗涤2次，将淋巴细胞浓度调整为（20〜40）X106mL-l,于患者前臂内侧分4~6点皮内注射，间隔3周注射1次（避开月经期），3次为1个疗程。第1个疗程结朿后2周,复查封闭抗体，如果转阳者，鼓励患者尽快受孕，妊娠后再继续免疫治疗12〜14周，B超检查提示胎儿正常则停止治疗。同时嘱咐患者妊娠后注意休息，保持情绪稳定。疗程结束后未妊娠者，

6、每3个月加强1次。1.3观察指标对两组患者的CD4+、CD25+、Tr表达率进行比较，同时将妊娠超过12周者视为妊娠成功，比较两组妊娠成功率。1.4统计学方法应用SPSS11.0统计软件进行统计学处理，计量资料以均数上标准差表示，两样木均数比较采用。针对计数资料和组间对比展开t检验和x2检验，在P<0.05时为差异具有统计学意义。2实验结果2.1治疗前后两组患者的CD4+、CD25+、Tr表达率比较治疗前后两组患者的CD4+、CD25+、Tr表达率经统计发现，观察组和对照组治疗前后患者的CD4+、CD25+、Tr表达率之间均存在显著差异（P<0.05）,表现为治疗后表达率均高于治

7、疗前。详见表lo1.2妊娠成功率统计发现，观察组患者妊娠成功率为94.4%,対照组妊娠成功率为93.l%o二者之间无显著差异（P>0.05）,详见表2。3讨论复发性流产给患者本人以及家庭带来诸多生理以及心理上的问题。现阶段，针对原因不明性复发性流产的流行病学、病因学、生殖免疫学等诸多研究为临床对该病的治疗提供了有利的依据。然而，至今还未有一个相对统一的方案［3］。经现代免疫学研究指出，人类胚胎的形成过程为一个同种半移植的过程，胎儿中来自父亲的那一半基因抗原针对孕妇而言为一种外来异