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1、采用组织芯片研究非小细胞肺癌中肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子C的表达及意义［摘要］目的采用组织芯片技术研究非小细胞肺癌中肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子c的表达，分析其临床意义及其相关性。方法制作186例非小细胞肺癌组织及23例正常肺组织芯片，用免疫组化S-P法检测组织芯片中肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子C的表达。结果在非小细胞肺癌中，肿瘤转移相关基因1、血管内皮生长因子C的表达阳性率分别为62.8%(103/186)和64%(119/186),与正常肺组织中的0(0/23)和17.4%(4/23)相比，差异有高度统计学意义(P0.05)o肿瘤转移相关基因
2、1阳性表达与血管内皮生长因子C阳性表达有关(P5cm处的正常肺组织为对照。1.2试剂羊抗人MTA1多克隆抗体和VEGF-C多克隆抗体均购自SantaCruz公司，即用型免疫组化超敏S-P试剂盒、DAE显色试剂盒均购自福州迈新生物试剂开发公司。柠檬酸抗原修复缓冲液、PBS缓冲液、苏木素染色剂、中性树胶封片剂、多聚赖氨酸、石蜡、各种浓度乙醇、甲醛等，均来自解放军第八一医院病全军肿瘤中心的病理科。1.3方法1.3.1组织芯片制作从病理科的存档中选取各型非小细胞肺癌蜡块，同时调阅相应的HE染色组织切片及患者的病历资料，同时新近收集肺癌及正常肺组织制备组织蜡块。将所有非小细胞肺癌组
3、织蜡块分类登记，按文献要求进行设计［4］。对每一组织标本，均先观察苏木精-伊红切片以确定肿瘤部位，每一例肺癌蜡块选取4点、正常组织蜡块选取2点，共制成20X12阵列块。1.3.2免疫组化方法采用S-P方法，柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复。在染色中，各种抗体染2张TMA的连续切片。另外还选择了10例相应非小细胞肺癌组织标本，作常规HE切片染色来验证组织代表性。阴性对照以PBS代替一抗。阳性对照以相应抗体的已知阳性切片作对照。结果判定:以非小细胞肺癌胞核或胞浆内出现黄色至棕褐色颗粒，定位较明确、染色明显的切片视为表达阳性。表达强度的分析，笔者采用每个切片选取5个视野，Image
4、-ProPlus(MediaCybeNeticsInc,USA)图像分析系统进行分析，测算单位面积平均光密度(0D)值。1.4统计学方法采用统计软件SPSS12.0处理。计数资料采用百分率表示，组间对比采用x2检验。相关性分析采用Pearson相关分析，以P0.05),但是在非小细胞肺癌TNM分期、淋巴结转移情况等方面差异有统计学意义(P2.3MTA1蛋白和VEGF-C蛋白阳性表达的相关性对MTA1、VEGF-C蛋白表达0D值进行了Pearson相关分析，结果表明两者有相关性(r二0.175,P0.05)o另外，本研究发现，MTA1蛋白在低分化癌组织中的阳性表达率明显高于
5、中高分化组织(P[7]Wery❷skaB,DziegielP,JankowskaR.Roleoflymphangiogenesisinlungcancer[J].FoliaHistochemCytobiol,2009,47(3)：333-342.[8]WangXL,FangJP,TangRY,etal.Differentsignificancebetweenintratumoralandperitumorallymphaticvesseldensityingastriccancer:aretrospectivestudyof123cases[J]・BMCCancer,20
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