安捷伦液相色谱仪常见故障排除.doc

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1、液相色谱仪常见故障排除 HPLC故障排除症状类型可能的原因解决方案基线噪声大随机性－污染物积聚冲冲洗柱；净化样品；使用HPLC级溶剂连续性－检测器灯故障更换紫外灯（寿命为1000小时）偶然性－外部电气干扰使用LC系统专用稳压器样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6双峰样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相滤芯堵塞更换并使用0.5μm孔隙率的在线过滤器柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙；重填柱进样器流路不通畅更换进样器转子柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部柱上样品超载使用更高负载量的固定相增加色谱柱内径减少样品量单

2、峰－存在干扰性组分净化样品；预分离拖尾峰开始出双峰请参见双峰存在未扫的死体积减少接头的数量确保进样器密封垫紧密确保接头正确固定碱性化合物－硅醇相互作用换成聚合物固定相碱性物质－硅醇相互作用使用更强的流动相或添加竞争碱（例如，三甲胺硅胶基－柱降解使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻峰展宽进样量过大降低进样溶剂的强度以集中溶质进样阀中的峰扩散在进样前/后引入气泡以减少扩散数据系统的采样速率过低增大采样检测器时间常数低调节时间常数使之与峰宽匹配流动相粘度过高提高柱温检测器池容积过大使用尽可能小的池容积（系统中无热交换器）注射器体积过大减少进样量保留时间长使用梯度洗脱

3、或较强的流动相压力波动单向阀泄漏更换单向泵密封垫泄漏更换泵密封微粒积聚过滤样品；在线过滤器；过滤流动相压力渐增微粒积聚过滤样品；在线过滤器；过滤流动相水/有机系统－缓冲液沉淀测试缓冲液-有机混合物；确保兼容性保留超出总渗透体积体积排阻－特异性相互作用添加流动相改性剂或更改溶剂保留时间不断变动柱温不断变化使柱恒温；绝缘；保证实验室温度恒定平衡时间不足以适应梯度洗脱要求，或等度洗脱流动相起变化确信在溶剂改变或梯度结束后至少10个柱容积通过色谱柱流动相组分选择性蒸发减少氦气的剧烈脱气；保持溶剂贮器盖好；制备新的流动相缓冲能力不足用>20mM浓度的缓冲液在线流动相混

4、合不一致保证梯度系统输送恒定组成；与手动制备流动相核对污染积聚冲洗色谱柱以去除污染物最初几次进样—吸附在活性部位用浓样品进样冲洗柱，使其处于正常状态保留时间逐渐缩短流速在增加检查泵以确保正确；否则需重调柱上进样超载减少样品键合固定相的流失保持流动相pH值在2-8.5间保留时间逐渐增加流速在减慢解决液流中的漏液现象，更换泵密封垫，检查泵的涡流和气泡硅胶填料的活化点使用流动相改性剂键合固定相的流失保持流动相pH值在2-8.5间流动相组成在变化确保流动相容器盖好硅胶填料的活化点流动相中加竞争碱硅胶填料的活化点固定相用更高覆盖度的填充料灵敏度问题峰位于检测器线性范围

5、之外稀释或浓缩使之处于线性区内最初几次进样—样品在样品池或柱中被吸附自动进样器流路阻塞用浓样品处理样品池/柱自动进样器流路阻塞检查流量情况，确保无阻塞现象进样器样品定量管未充满确保样品池中已充满样品在样品制品时有关的样品流失用内标法在制备样品，优化样品制备方法柱平衡时间减慢（离子对现象）长链离子对试剂平衡时间慢使用较短的烷链试剂 液相基线噪音问题的排查思路 常见色谱故障——基线噪音液相常见压力问题的原因分析 1.常见色谱故障——压力波动可能的原因：·溶剂进口过滤芯堵塞·溶剂未脱气·泵的密封垫老化·出口单向阀失效·主动阀失效最常见的原因是：泵内有气泡 2.常见

6、色谱故障——压力过低可能的原因：·溶剂进口过滤芯堵塞·连接管路泄漏或其它备件（泵头密封垫）·溶剂或流速改变·主动阀失灵·四元比例阀失灵·单向出口阀失灵·色谱柱失效（固定相流失） 3.常见色谱故障——压力过高可能的原因：·柱子进口过滤芯被污染·PURGE阀过滤芯被污染·色谱柱被污染·连接管路，尤其是针座毛细管堵塞·进样器旋转密封阀被堵塞·进样针或针座被阻塞