丙型肝炎病毒抗体试剂检测结果的可信度分析.doc

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1、我国丙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量试剂盒检测值的标准化饶慧瑛魏来季颖朱凌作者单位：100044，北京大学人民医院，北京大学肝病研究所*通讯作者：魏来，地址：北京市西城区西直门南大街11号，北京大学人民医院肝病研究所，100044，电话：（010）88325566，Email：weilai@pkuph.edu.cn【摘要】　目的　确定我国国家食品药品监督管理局批准上市销售的国内丙型肝炎病毒核酸（HCVRNA）扩增荧光定量试剂的检测值（单位：拷贝/ml）与样品的真值（单位：IU/ml）之间的换算公式，为HCV感染的临床诊断和治疗监测提供统一的HCVRNA载量检测标准。材料和方法用人AB型血清将

2、WHO第二代HCVRNA国际标准品（编号:96/798）配制成不同浓度的样品7份，7份样品的浓度分别为100000、50000、25000、10000、5000、2500、1000（IU/ml）。采用国内3种HCVRNA荧光定量试剂的2个不同的批次检测这9份不同浓度范围的标准品，每个批次重复测定4次。检测方法采用实时荧光定量聚合酶链反应方法。结果HCVRNA荧光定量试剂A的检测值（X）与样品的真值（Y）之间的关系为：Y＝0.75X-1366，r2＝0.99；试剂B的检测值（X）与样品的真值（Y）之间的关系为：Y＝0.93X＋1244，r2＝0.99；试剂C的检测值（X）与样品的真值（Y）

3、之间的关系为：Y＝0.49X＋2180，r2＝0.99。结论　根据3种不同试剂的检测值与真值之间的换算公式，能将检测值初步标准化，使不同试剂的检测值之间具有可比性，为HCV感染的临床诊断和治疗监测提供统一的HCVRNA载量检测标准。【关键词】　丙型肝炎病毒；核酸；荧光定量试剂盒；标准化丙型肝炎是一种主要经血液传播的传染病，丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus,HCV）感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞肝癌。目前，全球超过1.7亿人为慢性HCV感染者[1-3]。我国HCV感染的标化流行率约为3.2%，属于国际范围内的高流行区[4]，对于我国HCV感

4、染的预防控制、流行病学监测、治疗效果必须给予高度的重视。因此，我们需建立HCV的标准化检测。8HCV核酸扩增定量检测是复杂的生物学测定，核酸扩增检测结果报告的单位有很多种,如当量/ml、拷贝/ml、PCR检测单位/ml等等，不同实验室不同试剂之间结果很难进行比较。为了解决这个问题，世界卫生组织（WorldHealthOrganization,WHO）于1996年组织多中心合作研制了用于病毒核酸扩增检测的HCVRNA国际标准品[5-7]，单位为国际单位/ml（IU/ml）。目前，我国已有几百家临床实验室进行HCV核酸的PCR定量检测，均采用国产试剂盒，但由于缺乏统一的标准，结果之间没有可比

5、性。因此，亟待解决我国HCVRNA临床定量检测的标准化问题。本研究拟以英国国家生物制品及标准化控制研究所研制的WHO第二代HCVRNA国际标准品为参照，对目前我国国内上市销售的3种HCVRNA扩增荧光定量试剂盒进行标准化，确定各种试剂的检测值（单位：拷贝/ml）与样品的真值（单位：IU/ml）之间的换算公式，为HCV感染的临床诊断和治疗监测提供统一的HCVRNA载量检测标准，规范我国HCVRNA荧光定量检测试剂，为其与国际标准接轨奠定基础。材料和方法一、材料1.HCVRNA的WHO国际标准品：购自英国国家生物制品及标准化控制研究所（NationalInstituteforBiologic

6、alStandardsandControl,NIBSC），编号：96/798，浓度105IU/ml，每支0.5ml。保存于－80℃,用不含核糖核酸酶的灭菌双蒸水4℃复溶后使用。2.稀释用阴性血清：乙肝表面抗原（HBsAg）、抗-HCV、抗-HIV均为阴性的人AB型血清，购自天津市川贝生化制品有限公司。保存于－80℃,4℃复融后使用。3.HCVRNA荧光定量试剂：3种获得我国国家食品药品监督管理局（StateFoodandDrugAdministration,SFDA）批准的试剂，3种试剂批号分别为2007001和2007002，20060301和20060901，20061011和200

7、61221。4.仪器：Roche公司的LightCycle荧光定量PCR仪。二、方法1.标准品配制：用人AB型血清将HCVRNA国际标准品配制成不同浓度的样品7份，7份样品的浓度分别为100000、50000、25000、10000、5000、2500、1000（IU/ml）。2.检测方法：分别采用3种HCVRNA荧光定量试剂检测这7份不同浓度的样品中的HCVRNA载量。使用3种试剂时，均严格按3种试剂的说明书操作及判定结果。3.8