塞来昔布对不同激素受体乳腺癌细胞的放疗增敏作用的初步研究

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1、塞来昔布对不同激素受体乳腺癌细胞的放疗增敏作用的初步研究［摘要］目的对选择性环氧化酶-2(C0X-2)抑制剂塞来昔布对不同激素受体乳腺癌细胞的放疗增敏作用进行初步探讨。方法取指数生长期的不同激素受体乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231，分为对照组、药物组、照射组和实验组(射线+塞来昔布)，利用CCK-8实验测定细胞活性，Transwell实验观察细胞侵袭能力变化，细胞克隆形成实验检测放射增敏作用。结果在一定浓度范围内，塞来昔布可抑制两种细胞的活性，且抑制效应呈量效关系，塞来昔布还能抑制细胞侵袭能力。塞来昔布与X射线联用可显著降低

2、两种细胞的存活分数，在2Gy照射时最为显著。结论塞来昔布对人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231有显著的放射增敏作用，且能抑制两种细胞的侵袭能力，其机制有待进一步研究［关键词］塞来昔布；乳腺癌细胞；放射治疗；雌激素受体［中图分类号］R737.9［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2013)04(b)-0080-03放射治疗是乳腺癌的重要治疗手段。但是，在现有的放疗条件下，进一步优化射线物理剂量的分布已经十分有限，联合辐射增敏药物可能是提高放疗疗效的较好选择。选择性环氧化酶-2（C0X-2）抑制剂塞来昔布毒性小，且其联

3、合化疗药物在对结肠癌、肺癌、乳腺癌的体外和在体研究中取得良好的效果，联合放疗也有少量报道［1-5］，但有关塞来昔布对不同雌激素受体的乳腺癌细胞的放射增敏作用尚未见报道，本实验研究对这方面进行了初步探讨，为进一步阐明机制打下基础。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株与细胞培养人乳腺癌细胞株MCF-7与MDA-MB-231细胞由中国科学院上海细胞生物研究所提供；用含有10%的胎牛血清（杭州四季青公司产品）的RPMI-1640培养基（GibcoBRL公司），于37°C、5%C02、95%湿度C02培养箱进行培养。待细胞呈对数生长，即用0.

4、25%的胰蛋白酶（GibcoBRL公司）消化，传代。1.1.2主要试剂及仪器塞来昔布为美国辉瑞公司产品；CCK-8试刻盒购于日本同仁公司；Matrigel胶为美国BD公司产品；Transwell板为美国Corning公司产品；其他仪器包括流式细胞仪、直线加速器（瑞典医科迗公司）等。1.2方法1.2.1细胞照射直线加速器垂直照射，剂量率200cGy/min,照射野10cmX10cm,源皮距为100cm，六孔板底垫有1.5cm厚的补偿膜，以消除建成效应。1.2.2CCK-8实验MCF-7和MDA-MB-231细胞分别接种6X103个/孔和

5、5X103个/孔于96孔板中，培养24h左右，使细胞贴壁生长；塞来昔布终浓度为0、10、20、30、40、50、100、200wmol/L,复孔6个，换新鲜无血清培养基加于细胞孔中，分别培养24h和48h;培养结束前2h，加入CCK-8试剂，10PL/孔，反应2h,检测0D450。1.2.3Transwell侵袭实验塞来昔布浓度分别为0、20、50umol/L,作用于处于对数生长期的MCF-7和MDA-MB-231细胞，37°C，24h；实验前1d将MatHgel胶置于4°C使之溶解；Transwell板一孔的上室内加入30uL(Ma

6、trigel:PBS=1:4)稀释胶，37°C,3h；MCF-7和MDA-MB-231细胞分别5乂104个/200uL加于已经铺胶的上室中，下室内加入10%FBS1640培养液600yL；37°C,18〜24h；吸取上清，棉签仔细去除上室内残留的细胞和Matrigel；70%甲醇，300UL/孔，固定30min;PBS洗涤，3min/次，3次；苏木素，300uL/孔，染色10min;双蒸水洗漆，3min/次，3次；镜下计数细胞个数。1.2.4细胞克隆形成实验分塞来昔布组、单纯辐射组和辐射联合塞来昔布组，设0、1、2、4、6Gy五个辐射

7、计量点。MCF-7和MDA-MB-231细胞接种于六孔板中，塞来昔布浓度分别为0、20urnol/L,置于37°C培养24h;然后接受照射，照射后，将细胞置于37°C培养24h后换新鲜10%FBS1640培养液继续培养，根据细胞克隆生长情况培养10〜14d；克隆固定：倾倒出培养基，PBS轻轻冲洗2次，70%甲醇固定15min，吸去多余的甲醇，嗦干；Giemsa染色20min，双蒸水轻轻冲洗2次，吸去多余的水，晾干，计数肉眼可见的细胞克隆数（集落数）（彡50个细胞/集落），重复3次。根据公式：克隆数/接种细胞数X100%来计算生存率，利

8、用LQ模型拟合生存曲线。1.3统计学方法数据统计使用SPSS13.0软件。多组间数据比较使用方差分析，以P20为显著增强效应。2结果2.1CCK-8实验CCK-8实验显示，塞来昔布能有效抑制乳腺癌细胞株MCF-7和MDA