塞来昔布对宫颈癌hela细胞放射增敏效应的观察论文

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1、塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞放射增敏效应的观察论文宫文静何信佳于丽安永恒【摘要】目的探讨环氧合酶2（COX2）抑制剂塞来昔布对人宫颈癌HeLa细胞株的放射增敏作用及其机制。方法MTT实验测定塞来昔布对宫颈癌HeLa细胞的毒性，筛选出塞来昔布的半数抑制浓度（IC50），实验分为不同浓度药物组（10、20、40、80μmol/L）、对照组和空白组。克隆形成实验检测20%IC50浓度的塞来昔布对HeLa细胞的放射增敏作用，实验分为空白对照组、单纯放射组（2、4、6、8Gy）、单纯加药组（药物浓度为20%IC50）、放射加药组（20%IC5

2、0药物浓度+2、4、6、8Gy放射剂量），根据各组的克隆形成率，计算放射敏感性相关参数；流式细胞仪（FCM）分析细胞周期的分布情况，实验分为对照组和药物组（药物浓度为20%IC50）。结果MTT实验显示塞来昔布对HeLa细胞毒性呈现出浓度和时间依赖性，72h的IC50是44μmol/L；克隆形成实验显示.freelentofhumancervicalcancerHeLacellsanditsmechanism.MethodsMTTassayeasuretheproliferationinhibitionofcelecoxibonHeL

3、acellsanddeterminetheconcentrationIC50ofcelecoxib.Thecellsizedtothreegroups:druggroup(10,20,40,80μmol/L),controlgroupandblankgroup.Thecellsinistrated.TheclonogenicassayedtodeterminetheradiosensitivityeffectofcelecoxibonHeLacellsetry(FCM)toparecontrolgroupedependent.Valu

4、esofSF2,D0,.freelotionofapoptosis,inhibitionofsublethaldamageoftumorcellsandfacilitationofredistributionoftumorcellcycle.［KEYEM和胰蛋白酶由GIBCOBRL公司提供；胎牛血清由杭州四季青生物公司提供；四甲基偶氮唑盐（MTT）和二甲基亚砜（DMSO）购自Sigma公司；选择性COX2抑制剂塞来昔布（纯度为99%）由南京德宝生化器材有限公司提供。1.1.2主要仪器二氧化碳培养箱，AIRTECH超净工作台，紫外线可

5、见分光光度计，电子直线加速器，倒置显微镜，流式细胞仪。1.1.3细胞培养人宫颈癌细胞株HeLa细胞置于含有体积分数0.10胎牛血清、青霉素和链霉素各100kU/L的高糖DMEM培养液中，37℃、体积分数0.05CO2饱和湿度孵箱中培养，取对数生长期细胞进行实验。1.2方法1.2.1塞来昔布细胞毒性实验应用MTT实验。取对数生长期细胞，每孔5×103个接种于96孔培养板培养24h。贴壁后，更换含不同浓度塞来昔布（10、20、40、80μmol/L）培养液，同时设对照组(含有细胞和培养液但不加塞来昔布)和空白组（只有培养液，不含有细胞和塞

6、来昔布），分别继续培养24、48、72h,各组设6个复孔。各组药物作用结束后，弃去培养液，每孔各加入100μL培养液和10μL的MTT,继续培养4h后，加150μLDMSO,避光震荡10min,紫外线可见分光光度计测各孔490nm处的吸光度（A）值。实验重复3次。计算各组的细胞增殖抑制率。细胞增殖抑制率=（1-实验组A值/对照组A值）×100%，根据半数抑制浓度（IC50）计算软件计算塞来昔布作用HeLa细胞后50%细胞生长抑制的浓度，即IC50。1.2.2放射敏感性测定药物配制：以DMSO溶解塞来昔布粉剂，配成9mmol/L母液，用

7、时稀释至所需浓度。实验分成4组。①空白对照组：不做任何处理；②单纯放射组：设不同照射剂量（2、4、6、8Gy）亚组；③单纯加药组：为了避免药物对细胞的毒性作用，药物浓度取20%IC50（9μmol/L）；④放射加药组：9μmol/L的塞来昔布并进行2、4、6、8Gy不同剂量照射。取对数生长期的HeLa细胞，以每皿1×105个接种培养24h。细胞贴壁后，更换新鲜培养液（单纯加药组、放射加药组培养液含9μmol/L塞来昔布），继续培养72h后，单纯放射组和放射加药组分别予以不同剂量照射。照射后，培养皿置于体积分数0.05CO2孵箱中培养4

8、h。根据不同照射剂量（0～8Gy），接种200、200、200、500、500个细胞到6孔板（每一剂量点设3个平行孔）培养12d，低倍镜下计数大于50个细胞的克隆数。实验重复3次。应用克隆形成实验法计算细胞存活分数，克隆