微柱凝胶法在不规则抗体特异性鉴定中的应用

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1、微柱凝胶法在不规则抗体特异性鉴定中的应用【摘要】目的：探讨微柱凝胶法在血型不规则抗体特异性鉴定中的应用。方法：分别用盐水法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法对笔者所在医院64例不规则抗体阳性患者进行抗体特异性鉴定。结果：盐水法检出2例抗体，抗人球蛋白法检出55例抗体，微柱凝胶法检出62例抗体。其中Rh系统抗体24例，MNSs系统11例，Lewis系统9例，Diego系统2例，抗-E联合抗-Mur1例，未确认抗体特异性17例。结论：微柱凝胶法应用于不规则抗体特异性鉴定敏感性高、特异性强，操作简便、快捷，结果判

2、读清晰易于标准化。【关键词】微柱凝胶法；抗人球蛋白法；不规则抗体；抗体特异性不规则抗体是指抗A、抗B以外的血型抗体，在临床上易引起输血不良反应、新生儿溶血病、血型鉴定及交叉配血难等。输血前对受血者进行血型不规则抗体筛选、特异性鉴定及交叉配血试验，是确保临床输血安全和有效的重要措施。笔者所在医院采用盐水法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法对拟输血和手术的患者进行血型不规则抗体筛选，对结果阳性者再进行抗体特异性鉴定，为患者选择相应抗原阴性及交叉配血试验相合的血液进行输注，保证了临床输血治疗的安全性和有效性。1材

3、料与方法1.1一般资料选自笔者所在医院2012年10月-2014年2月住院申请输血和手术备血的7596例患者筛查出的不规则抗体阳性64例，年龄26〜85岁，男16例，女48例，有输血史或妊娠史者52例，无输血史或妊娠史者12例。1.2方法1.2.1仪器与试剂全自动血型与配血分析系统（强生公司）；Diana微柱凝胶抗球蛋白卡、低离子介质溶液、专用孵育器、离心机（西班牙黛安娜公司）；KA-2200离心机（日本九保田公司）；上海产的电热恒温水浴箱。抗人球蛋白试剂、抗体筛选细胞、谱细胞、抗M抗体、抗P1抗体

4、、抗C抗体、抗c抗体、抗D抗体、抗E抗体、抗e抗体、2_Me试剂（上海血液生物医药有限责任公司）；试剂均批检合格并在有效期内使用。1.2.2不规则抗体的筛查取患者EDTA二钾盐抗凝血标本4mL,未抗凝标本4mL，3000r/min离心5min后，采用盐水介质（室温、4°C、37°C）和微柱凝胶抗球蛋白法同时检测参照文献［1］，全自动分析系统检测出的阳性结果再用Diana微柱凝胶抗球蛋白卡复查。1.2.3不规则抗体特异性鉴定1.2.3.1盐水法和抗人球蛋白法在11支试管内分别加入1至10号谱细胞及洗涤

5、三次的2°/。〜5°/。自身细胞悬液各1滴，各加入被检者血清2滴，混匀，分别置室温、4°C、37°C下离心观察并记录结果，后置37°C孵育1h，用生理盐水洗涤3次，倒尽末次洗涤的盐水，吸干试管边缘的水分，于试管内加入抗人球蛋白试剂2滴，3000r/min离心15s，观察结果，有凝集者为阳性，无凝集者为阴性；同时用IgG抗D致敏的2%〜5%的0型RhD阳性压积红细胞做阳性对照，AB血清2滴加2%〜5%的0型RhD阳性压积红细胞做阴性对昭/ns1.2.3.2微柱凝胶法在微柱凝胶卡上标记被检者姓名及谱细胞

6、的编号、自身细胞，用微量加样器分别加入低离子液稀释的0.8%〜1%的谱细胞悬液、自身细胞悬液各50PL，后加被检者血浆25UL于微柱凝胶卡中，置37°C专用孵育器内孵育15min,1100r/min离心9min,肉眼观察结果。红细胞均匀沉于管底者为阴性，悬浮于凝胶表面或凝胶中段者为阳性。根据实验结果对照标准细胞谱确定抗体的特异性。对鉴定为特异性抗体者，采用相对应的抗体试剂检测红细胞抗原是否为阴性，以确认所检抗体的准确性。1.2.4不规则抗体免疫球蛋白类别鉴定方法采用巯基试剂(2-Me)区分IgG和I

7、gM技术。1.3统计学处理采用SPSS19.0统计学软件进行数据分析，检验采用配对计数资料的字2检验，P〈0.05为差异有统计学意义。2结果2.13种方法对血型抗体特异性鉴定结果64例不规则抗体阳性患者，盐水法检出特异性抗体2例，抗人球蛋白法检出55例抗体，微柱凝胶法检出62例抗体。抗人球蛋白法和微柱凝胶法两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。2.2不规则抗体特异性分布64例不规则抗体阳性患者中Rh系统抗体24例，丽Ss系统11例，Lewis系统9例，Diego系统2例。抗D3例、抗Ec11例、

8、抗E9例、抗M7例、抗Lea8例，抗Mur、抗Dia各2例，抗c、抗N、抗Leb、抗s各1例，抗-E联合抗-Mur1例，未确认抗体特异性17例。3讨论不规则抗体分为IgM和IgG类抗体，IgM抗体是天然产生的，IgG抗体是通过妊娠免疫、注射、异型输血等刺激产生的，其分子量小可通过胎盘引起新生儿溶血病及输血不良反应。输血前常规检查不规则抗体并进行抗体特异性鉴定对保障安全输血至关重要。目前用于抗体特异性鉴定的方法有盐水法、凝聚胺法、抗人球蛋白法、微柱凝聚法等。盐水法用于检