基因工程复习知识点

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1、基因工程复习资料一、知识点1.根据基因工程的定义，能替代基因工程的术语。2.含有II型限制性内切酶切位点的DNA片段的特点。3.已知一双链DNA分子，分别用限制酶I、限制酶II切割单独切割得到不同片段;同吋用限制酶I和限制酶II切割吋，得到另外的片段，据此分析该双链DNA分子4.质粒分子生物学的描述。5.在植物基因工程中广泛使用的载体。6.质粒带有a互补的lacZ"标记基因，那筛选培养基屮加入显色底物和诱导物分别为？7.载体常用的选择性标记：抗生素、生化标记、营养缺陷型标记的括哪些(要能区分缩写符号)。8.DNA双链是靠什么化学键维持？9.能有效区分重组子与非重组子的是方

2、法有哪些？10.离体cDNA合成中所涉及的工具酶是有哪些？11.强化基因转录的元件是哪些？12.基因调控元件中属于负调控顺式作用元件的是哪些？13.关于包涵体的叙述。14.在单子叶、双子叶植物及动物的遗传转化过程屮，应用最成功的间接转化法分别是什么15.在对转基因植物进行分子鉴定时，检测外源基因的整合、表达、转录，分别可以采用哪些方法？16.细菌存在限制-修饰的现象，其生理意义是什么？17.TaqDNA聚合酶的发现使得PCR技术的广泛运用成为可能，是利用其哪个特点？1.关于柯斯质粒(cosmid)描述。2.Cosmid、X-DNA、Plasmid几种常用载体的装载量大小比

3、较3.载体质粒pBR322上的两个选择性标记：Ap'>Tc它们分别含有一个单一酶切位点：PstI、SphI。若将一外源基因插入Apf中的PstI位点，那么转化子和重组子如何筛选，若插入Sph1又如何筛选？4.DNA-DNA，DNA-RNA分子杂交的化学原理是什么（靠什么维持其双链稳定性）？5.cDNA法获得0的基因的特点表现为？6.原核生物启动子的特征是有哪些？7.强化mRNA翻译的元件是哪些？8.高等哺乳类动物基因在大肠杆菌中高效表达时，包涵体形成的原因是？9.动物基因转移法屮的胚胎干细胞法有何特点？（）10.如何正确理解基因漂移？11.熟悉pBR322、pUC18/

4、19载体的组成元件及作用、简写所代表的含义。12.基因表达载体表达盒的组成必需含有启动子、终止子、复制原点、目的基因、报告基因13.动物基因转移过程屮，实际应用屮主要有哪些方法？二、专业术语1.基因工程；2.酶的星号活性；3.黏性末端；4.人工染色体；5.质粒的不相容性；6.核酸分子杂交；7.逆转录PCR;8.RACE；9.简并序列；10.基因组文库；11.衔接物；12.感受态细胞；13.核糖体结合位点；14.基因漂移；15.冋质性原则。三、思考题1.DNA连接酶奋何作用特点和使用价值？2.质粒及其基木特征是什么？3.PCR技术的原理和基本过程是什么？4.pBR322质粒

5、载体有tetr和ampF表型，如果在teV中有一EcoRI的酶切位点，现用EcoRI切割载体进行基因重组，如何利用抗生素变化筛选含有插入片段重组体？如果FxoRI的酶切位点amr/又如何？（插入失活法）1.基因组DNA文库构建需要的满足条件及其基本步骤是什么？2.原核生物基因表达与调控具有怎样的特点？3.原核生物基因表达与调控具有怎样的特点？4.如何以PUC19为载体进行DNA片断克隆（全过程）？5.Klenow片段和大肠杆菌DNA聚合酶I有何异同？6.载体及其在基因工程时必须具备的条件？7.影响DNA琼脂凝胶电泳的因素有哪些？8.多种载体屮都采用or互补的方式筛选重组子

6、，如何利用a-互补进行重组子筛选？（过程和原理）9.cDNA文库构建的需要满足条件和基木步骤是？10.大肠杆菌表达载体的必须结构元件及作用？11.根据pBR322的结构图，利用BainHI限制性内切酶切割外源DNA片断后，怎样进行这一重组过程？怎样选择重组的转化菌？如果利用Pstl切割，又如何重组、选择？