酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析

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1、酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析钱瑞(山丹县人民医院734100)【摘要】目的通过对酶联免疫吸附试验检测的影响因素分析，探讨各因素对结果的影响，以便寻找解决的方法和加强质量控制，从而保证检测结果的准确性和精确性。【关键词】酶联免疫吸附试验影响因素分析【中图分类号】R446.61【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2013)41-0059-02酶联免疫吸附试验(ELISA)是将抗原抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来，可敏感地检测牛物标木中微量的特异性抗体或抗原的临床检验方法，而且其反应中各组分的

2、成木较为底廉,特别是对肝炎病毒的检测,最基层的医院也能开展。因其操作简单，灵敏度高，特异性好，经济安全，不需要特殊设备等特点而在临床上广泛应用。为辅助临床诊断与牛物科研起到了积极的推动作用。在从事检验工作多年中深知ELISA测定中影响因素较多，由于其操作步骤复杂，操作过程中每个环节都会对试验结果产牛影响，甚至出现错误的结果，因此，必须加强ELISA检测的全面质量控制，保证其结果的准确可靠。现将影响因素做以分析。1材料1.1试剂的准备目各种ELISA试验均有商品化的专用试剂盒。应选择质量优良、有批准文号且在有效期内的检测试剂，严格

3、按照试剂说明书进行操作。从冰箱中取出的试剂应放在室温下或37°C平衡30分钟再进行测试。保存试剂盒的冰箱应经常检查储存温度并做好记录，冰箱应避免频繁开关,试剂使用前应摇匀。1.2标木的准备酶联免疫吸附实验中标木的质量也是影响结果的关键因素之一，标木的干扰物质容易引起假阳性或假阴性的结果。1.2.1严格执行样本的查对制度，接受标本应将标本上的标签与申请单逐一核对，验收签字。对科室自采的标本，接到申请单后，按申请单上的姓名将受检者喊应，确定性别、年龄、，然后编号抽血，避免标本采集错误。1.2.2抽血时，应尽量避免溶血，对于重度溶血标

4、本应重新采血进行测定。因标本溶血红细胞破坏溶解吋释放出犬量血红蛋血红蛋白中的亚铁血红素具有过氧化物酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA试验测定中，可能会增加非特异性显色而出现假阳性结果，对于严重脂血，黄疸及药物治疗等影响检测结果的标本，应叮嘱受检者适吋重新检测。123标本在低温下保存吋间不宜过长。通常血清标本可在2~8°C保存，如样品在7天内不测定，需将血清或血浆和血细胞分离后，置一20°C保存。冷冻保存标本避免反复冻融，标本的反复冻融会因其所产生的机械剪切力对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，是抗体效价下降从而引起假阴性结

5、果。1.2.4血清标本应充分离心，彻底去除纤维蛋白，否则可因残留的纤维蛋白原非特异吸附于微孔而造成假阳性结果。1.2.5标本污染生化与免疫标本的混用，可能造成免疫检测标本的污染。其原因是免疫指标是定性检测，标本在检测生化试验时极微量的交叉污染都可能造成免疫测定结果的不准确。此外，全自动酶免疫分析仪的加样针或加样吸头清洗力度不够，造成阳性标本和其他标本的污染。2方法2.1加样加样应严格按照试剂盒说明书中所规定的量和顺序进行，加样时应将标本加在微孔反应板底部，避免加在孔壁上部，注意不可溅出，不能产生气泡，如不慎将标本或试剂溅出孔外时

6、，应用吸水纸轻试吸干，加标本--般采用手工加样或者加样器。手工加样每次必须换吸嘴，以避免交叉感染。要掌握好并在实际操作中揣摩使用技巧，避免吸样量过多或过少。加标本一般采用手工加样或者加样器。手工加样每次必须换吸嘴，以避免交叉感染。要掌握好并在实际操作中揣摩使用技巧，避免吸样量过多或过少。加样器在长时间使用时会因机械磨损或推动杆内附着的血痂等原因造成加样不准，因此必须定期对加样器进行维护和校准。手工操作吋，微孔反应板加样后应及吋温育，标本加样较多吋应分批操作，以免加样后温育前等待时间过长。2.2温育ELISA反应是抗原、抗体的结合

7、在固相表面上发生的一系列的反应,抗原抗体结合是一个逐步平衡的过程，需要经过扩散才能达到反应的终点，因此ELISA反应需要一定吋间的温育。温育也是影响检测结果的关键因素，尤其是对弱阳性标本影响最为明显，温育吋严格按试剂盒操作说明书控制温育吋间，不能人为延长或缩短温育吋间，反应吋间要准确，时间过短，特异性结合不够，易产生假阴性；时间过长，非特异性结合物紧附于反应孔，难以洗脱，测定值偏高，37°C是实验室中最常用的温育温度，温育方式常采用温箱法、微波辐射法和水浴法。其中水浴法能较好解决因受热不均衡所致的周围孔与中央孔结果的吸光度差异（

8、即“边缘效应”）可将ELISA板置于水浴箱中，温育吋微孔反应板不要叠加，要加封贴封纸，这样可以防止孔内液体成分蒸发或水珠等杂质滴入孔内影响检测结果，封片不能重复使用。2.3洗涤洗涤虽然不是一个反应步骤，但也影响实验的成败，其目的是去除反应体系中与反应无关的成分，