汉防己碱的提取分离及检验

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1、美国得克萨斯生物医学研宄所研宄人员发现，中草药提取成分汉防己碱是埃博拉病毒“克星”，有望在今后两到五年内用于治疗埃博拉感染疾病。生物碱的提取分离实验材料汉防已粗粉试剂、试剂盒丙酮、乙醇、水、石油醚、乙酸乙酯、硅胶、氧化铝、碘化铋钟试剂、丙酮仪器、耗材圆底烧瓶、层析柱、长颈漏斗、滤纸片、气泵、滴管、铁夹、玻璃标口塞接头、玻璃蒸发器一、提取分离实验X.回流提取HOOg汉防己粗粉于1-000w［圆底烧瓶中，加50095"%乙醇，回流1h，过滤,同法提取一次，合并乙醇提取液，浓缩至干，得浸膏。之低压柱层析低压柱层

2、析在低压下（^.5〜3kg/眞之，一般以3〜U采用颗粒直径介于经典柱层析〜;ZOOpm）和HPLC（〜57卜似）之间的薄层层析用硅胶（或氧化铝）H或^56?〜75pm）作为填充剂的■-•种柱层析柱，其基本原理与HPLC相同，分离效果也介于经典柱与HPLT之间，用减压干法装柱，铺层紧密均匀，层析带分布集中整齐，同时薄层层析的最佳分离溶剂系统可以直接用于低压柱层析，它是一种分离效果较好，设备简单，操作方便，快速的方法，适用于天然产物的常量制备性分离。（工）装柱减压干法装法，层析柱规格：柱长d内径工cm,共装硅胶

3、约之5水高约之6>cm）0（2）拌样加样取汉防己碱约rt%kv^,加少量丙酮热溶（:刚溶为度）用滴管加到二55硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击，待样品表而平整不拌动时，上面再盖约：cm高的空白硅胶，再加盖一圆形滤纸片，压紧。（3）洗脱开动气泵待用。用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少S洗脱剂（:石汕醚：乙酸乙酯3:i），当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂（:共约mO,迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧（:防加压时接头冲开），连接气泵接头，控制流速：twf

4、/M一，每rto分钟左右一管，收1之〜工5•份，洗脱全过程约2小时。（4）检查各流份分別移入小玻璃蒸发器屮，于水浴上浓缩，分別通过TLC检查，吸附剂：硅胶6?，展开剂：石汕醚：乙酸乙酯3:!•，改良碘化铋钾试剂喷雾显色，以汉防已甲素、乙素为标准品对照，合并相同组分，分别获得甲、乙素粗品，用丙酮重结晶，测定wp。二、鉴定方法工.有机胺碱的T1X吸附剂：薄层层析硅胶6；,用水液制板，rtrto°C活化1小时。样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、展开剂：石油醚-（6:之：工）显色剂：改良碘化铋钾试剂（:展开后用电吹

5、风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰）现象：甲素显色后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨认。总生物碱的提取和亲脂性与亲水性生物碱的分离汉防己药材粗粉100g0.5%H2SO4液渗漉（注一）酸水渗漉液（为原料的3〜10倍量V/V）加新鲜石灰乳调pH9〜10,静置，抽滤泥黄色沉淀碱水液（水溶性季铵碱及水溶性杂质）将沉淀与静砂拌勻（注二）80°C烘干.置索氏提取器中用乙醚（约180ml）提取至提尽生物碱（注三）收乙醚（注四）乙醚提取物用95%乙醇40〜60ml回流热溶后倾入500ml水中

6、，力口30gNaCI盐析水溶上加热至凝结，静置抽滤白色沉淀（亲脂性叔铵总碱，以汉防己甲素、乙素为主）注工：将汉防已祖粉加适S酸水液，以能将生药粉末润湿为度（:约isoM/），充分拌匀，放置半小时，均匀而致密地装入渗筒内，用锥形瓶底部或其它平底工具压紧，供渗漉用，流速约工.Smf/分。注之：净砂必须事前洗净烘干，拌和y:最好不要超过126?+以免索氐提取器一次装不下或装得过多。提不尽生物碱。注3:检查生物碱是否提尽的方法，是取最后一次乙醚提取液约数滴，挥去乙醚，残渣加容解后，加改良碘化铋钾试剂一滴，无沉淀折出

7、或明显浑浊时，表明生物碱己提尽，或基本提尽。反之，应继续提取。注4:先将提取器内滤纸筒取岀。然后将提取玻筒内最后一次乙醚提取液倾fli（另器贮存：），再将提収玻筒安装好，继续加热，回收烧瓶屮乙醚于玻筒屮，至烧瓶lAl的乙醚提収液体积较小时，停止回收，将烧瓶中乙醚提取液倾出。二、鉴定方法X.有机胺碱的TLC吸附剂：薄层层析硅胶6；，用水液制板，活化1小时。样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、总碱③展开剂：石油醚-（6:之：工）显色剂：改良碘化铋钾试剂（展幵后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰）现象：甲素显色

8、后呈淡棕色，2小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助其辨以下实验可在课后选做2-衍生物制备取汉防已甲素+溶于2丙酮中，滴加苦味酸饱和水溶液至不再折出黄色沉淀为止，抽滤收集沉淀，顺次以少量水乙醚洗涤，乙醇重结晶，得汉防己甲素苦味酸盐，