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1、ZL-9601赖氨酸生产菌某些特性及发酵试验的研究2006-1-514:52:38新闻来源：农业生物技术学报李秀锦仲飞刘绍军常学东孙树杰赵彦波冀振华(河北农业技术师范学院，昌黎066600)摘要：本研究对ZL-9601赖氨酸生产菌菌株的形态、培养特性和生理生化特性进彳了了初步鉴定和分析，并以糖蜜为主要原料，初步确定了该菌的产酸能力。结果表明，该菌为短杆菌(0.8-1.0x1.0〜2.5pm)z需氧，发酵最适温度30C,最适pH7.0〜7.2,最适碳源为葡萄糖，最适氮源为硫酸较；该菌不分解赖氨酸，町耐15%的赖氨酸，耐3
2、0%的葡萄糖。以糖蜜为主要原料，金最适温度和pH的条件下，产酸可达6%以上。关键词：ZL・9601菌种；赖氨酸；发酵；菌种特征赖氨酸是人和多种动物的必需氨基酸。在谷类食品和饲料中添加适最赖氨酸可提高这类食品或饲料中蛋白质的营养价值。忖前，在国内外帀场上，赖氨酸的需求量日益增加，培有赖氨酸高产菌株和研究最佳发酵工艺条件便受到人们的普遍重视［1-4许多高产菌株陆续被选冇出來。如国内选冇的TL・1菌株产酸量为4.5%。为进涉提高赖氨酸的产暈，人们乂在这些菌种的基础上通过各种选育过程得到更高产的菌株9。如ZL-9601赖蹴酸
3、生产菌株就是由谷氨酸棒杆菌AS1.563通过进•步诱变处理选育出的窩产菌株。木研究主要就ZL-9601菌株的形态、培养特性和生理生化特性进行了初步鉴定和分析，并以糖蜜为主耍原料进行发酵试验，旨在为实际生产确定最佳发酵条件提供科学依据。1材料与方法1.1菌种科院微生物所提供)的诱变株，遗传标记为AECrzHom-o1.2主要培养基1.2.1斜面种子培养基牛肉膏1.1%,蛋白腺1.0%,葡萄糖0.5%,NaCI0.5%,琼脂0.2%,PH7.0,在0.14mpa压力下灭菌20minz后置于37°C培养箱培养24h,备用。1
4、.2.2发酵种子培养基糖蜜2.0%,豆饼水解液0.5%,(NH4)2SO40.4%,CaCO30.5%,K2HPO40.1%,MgSO40.04%zpH7.0，丁•250mL三角瓶内装25mL种子培养基，在0.14mpa压力下灭菌20mino1.2.3发酵培养基糖蜜20%,豆饼水解液1.0%,玉米浆0.6%,(NH4)2SO42%,K2HPO40.1%,MgSO40.05%,FeSO420mgzMnSO420mgzpH7.0zf250mL•:角瓶装液25mL发酵液,在0.14mpa压力灭菌20minz冷却后接种。1.3
5、培养条件将经斜ifii培养活化的菌种接种于发酵种(培养基中，置于往复摇床上振荡培养24h(30°C)为种r培养物;按1：10(64xlC)7/mL菌体)的接种量将种子培养物接种于发酵培养基屮，在30±10°C,PH7.0〜7.2条件下，在往复式摇床(振幅5〜8cm,频率120次/min)发酵72h。1.4其它特殊培养基淀粉水解培养基，“引味试验培养基，屮基红试验培养基，M・R试验培养棊，V・P试验培养某，芽抱培养基，高丝氨酸营养缺陷型培养基等。1.5试验及测定方法菌体形态观察、菌种培养特性和菌种主要牛理牛化特性检查主要
6、参照《工业微纶物试验技术手册》的方法"叭发酵液赖氨酸的测定采用苗二酮比色法ril并加以改进。其主耍操作过程：吸取发酵液4mL,离心（6000r/min,10min）i-菌体及杂质。取上清液2mL,加讳匚酗试剂（A液：即三«1.25g溶于94mL乙:醇甲瞇中；B液:CuCI2*2H2O1.97g溶于32mL0.1mol/L柠檬酸溶液中；将A、B两液混合，用蒸他水定容到250mL）4mLz混合，在沸水浴加热20min,冷却后在生化自动分析仪测定475nm处的吸光度值，通过查赖氨酸标准曲线得知发酵液中赖氨酸的浓度。1.6主
7、要仪器560■生化分析仪（上海第三分析仪器厂），SHA-C水浴恒温振动器（江苏常州国华仪器厂），高压蒸汽灭菌锅，显微镜，超净工作台等。2结果与分析2.1菌体形态特征观察由表1可以看出，该菌为格兰氏阳性杆菌。短杆状或球形，无鞭毛，不形成芽抱。斜而菌种细胞较小，出被培养到-级种f培养基时，繭体体积变人，但在二级种『培养基和发酵培养基时（开始产酸），菌体又渐渐变小、变圆。2.2细菌的培养特征表1菌体形态特征Table1Themorphologicalcharacteristicsofthestrain项GItems培养基Me
8、dium形态特征Morphologicalcharacteristics格兰氏染色普通肉汁斜面和平板阳性抗酸染色普通肉汁斜面阳性形态普通肉汁斜面和平板短杆状或棒状、两端钝閲、不分枝、细胞排列为单个、成对、''八"字或''V"字形运动能力种了培养棊无鞭毛、不运动芽抱芽抱培养基不形成芽砲菌体大小种子培养棊0.8^1.0x1.0〜2.5
