白细胞检验的基本方法教学

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1、第十章白细胞检验的基本方法第一节白细胞功能检验一、墨汁吞噬试验二、白细胞吞噬功能试验三、血清溶菌酶活性试验四、硝基四氮唑蓝还原试验五、白细胞趋化性试验六、吞噬细胞吞噬功能试验第一节一、墨汁吞噬试验【原理】血液中中性粒细胞及单核细胞对细菌、异物等具有吞噬作用。在一定量的肝素抗凝血中，加人一定量的墨汁，经37℃温育4小时，涂片染色镜下观察吞噬细胞对墨汁的吞噬情况，并计算吞噬率及吞噬指数。【参考值】成熟中性粒细胞吞噬率74％±15％，吞噬指数126±60；成熟单核细胞吞噬率95％±15％，吞噬指数313±86。下一页第一节第一节【临床评价】粒细胞的吞噬功能仅限于成熟阶段，

2、单核细胞幼稚型和成熟型都具有吞噬能力。急性单核细胞白血病M5a为弱阳性，M5b吞噬指数明显增高。急性粒细胞白血病（M2）、急性淋巴细胞白血病和急性早幼粒细胞白血病的原始及幼稚细胞多无吞噬能力，吞噬试验为阴性。急性粒-单核细胞白血病呈阳性反应，对鉴别有一定价值。慢性粒细胞白血病的成熟中性粒细胞吞噬能力明显减低。上一页下一页M5骨髓象的墨汁吞噬试验返回第一节二、白细胞吞噬功能试验【原理】分离白细胞悬液，将待测的吞噬细胞与某种可被吞噬而又易于查见计数的颗粒物质如葡萄球菌混合，温育一定时间后，细菌可被中性粒细胞吞噬，可在镜下观察中性粒细胞吞噬细菌的情况，根据吞噬率和吞噬指数即

3、可反映吞噬细胞的吞噬功能。下一页第一节【参考值】1.吞噬率（％）=吞噬细菌的细胞数／200个（中性粒细胞）X100％；正常人为628％±114％2.吞噬指数＝200各中性粒细胞吞噬细胞总数／200个（中性粒细胞）；正常人为1.06±0.05上一页下一页第一节【临床评价】吞噬细胞分大吞噬细胞和吞噬细胞两大类。前者包括组织中的巨噬细胞和血循环中的大单核细胞，后者主要是中性粒细胞。本试验可了解中性粒细胞的吞噬功能。如吞噬率和吞噬指数增高，反映中性粒细胞吞噬异物功能的增强，常见于细菌性感染。对疑有中性粒细胞吞噬功能低下者，有帮助确诊的价值。上一页第一节返回三、血清溶菌酶活性试

4、验【原理】溶菌酶能水解革兰氏阳性球菌的细胞壁乙酰氨基多糖成分，使细胞失去细胞壁而破裂。以对溶菌酶较敏感的微球菌悬液为作用底物，根据微球菌的溶解程度来检测血清或尿中溶菌酶的活性。【参考值】血清（5－15）mg／L尿（0－2）mg／L（比浊法）下一页第一节【临床评价】l.血清溶菌酶含量增高可见于部分急性髓细胞白血病。①急性单核细胞白血病②急性粒-单核细胞白血病③急性粒细胞白血病2．血清溶菌酶含量减低急性淋巴细胞白血病多数减低，少数正常。慢性粒细胞白血病血清溶菌酶含量正常，但急变时下降。上一页第一节返回四、硝基四氮唑蓝还原试验【原理】硝基四氮唑蓝（NBT）是一种染料，其水溶

5、性呈淡黄色。当被吞入或掺入中性白细胞后，有产生过氧化物酶的作用，可接受葡萄糖中间代谢产物葡萄糖-6-磷酸在已糖磷酸旁路代谢中NADPH氧化脱下的氢，而被还原成非水溶性的蓝黑色甲颗粒，呈点状或片状沉着在胞浆内有酶活性的部位，可在显微镜下观察并计数阳性细胞百分比。【参考值】正常成人的阳性细胞数在10％以下。若有10％以上中性粒细胞能还原NBT，即为NBT还原试验阳性；低于10％则为阴性。下一页第一节【临床评价】1.用于中性粒细胞吞噬杀菌功能异常的过筛鉴别和辅助诊断儿童慢性肉芽肿，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症，髓过氧化物酶缺乏症和Job综合征，NBT还原试验阳性。上一页第一

6、节2.用于细菌感染的鉴别3.器官移植后发热的鉴别4.无丙种球蛋白血症、镰状细胞病、恶性营养不良等NBT还原阳性细胞比例可降低。5．新生儿、小儿成骨不全症、心肌梗死急性期、淋巴肉瘤、NBT还原阳性细胞比例可增高。返回五、白细胞趋化性试验【原理】在微孔滤膜的一侧放入粒细胞，另一侧放入趋化因子（细菌毒素、补体C3a、淋巴因子等），检测离体粒细胞潜过滤膜到达趋化因子这一侧定向移动的能力。【参考值】趋化指数3.0－3.5下一页第一节【临床评价】趋化性是粒细胞到达炎症局部所必需的。本试验是观察粒细胞向感染灶运动能力的一项重要检测方法。趋化功能异常可见于Wiskot-Aldrich

7、综合征、幼年型牙周炎、糖尿病、烧伤、新生儿、慢性皮肤粘膜白色念珠菌病、高IgE综合征、先天性鱼鳞病、膜糖蛋白（相对分子质量11000）缺陷症、肌动蛋白功能不全症、Chediak-Hisashi综合征。上一页第一节下一页Chediak-Hisashi综合征血象骨髓象返回第一节六、吞噬细胞吞噬功能试验【原理】活体巨噬细胞、单核细胞在体内外均有吞噬细菌、异物的功能，在体外将细胞与异体细胞或细菌混合孵育后，染色观测其吞噬异体细胞或细菌的数量，可了解其吞噬功能。利用中药斑螫在人的前臂皮肤上发疱，造成非感染性炎症，诱使单核细胞游出血管大量聚集于疱液内，抽取疱液则