研究生课程-基因工程考试复习题集

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1、名词解释1、基因组基因组应该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子。说的更确切些，核基因组是单倍体细胞核内的全部DNA分子；线粒体基因组则是一个线粒体所包含的全部DNA分子；叶绿体基因组则是一个叶绿体所包含的全部DNA分子。2、星号活性在非最适的反应条件下，酶的识别特异性降低，产生非特异性带，这种酶切特异性降低的现象，称为星活性。3、退火是指在温度降低时，DNA发生复性的过程，即变性后的两条单链以碱基互补为原则配对形成氢键，结合成双链。4、BLASTBLAST是"基本局域联配搜索工具"（

2、BasicLocalAlignmentSearchTool）的字头缩写，是最常用的比较核酸和蛋白质同源性的比较工具。BLAST程序能迅速与公开数据库进行相似性序列比较。BLAST结果中的得分是对一种对相似性的统计说明。5、a•互补有的质粒载体上带有B■半乳糖昔酶基因（lacZ）的调控序列和P■半乳糖甘酶N端146个氨基酸的编码序列。其相应宿主细胞带有半乳糖营酶C端部分序列的编码信息。在各自独立的情况下，载体和宿主细胞编码的半乳糖昔酶的片段都没有酶活性。但它们融为一体时可形成具有酶活性的蛋白质。这种现象叫a•

3、互补。简言乙A•互补是指E.coliB•半乳糖昔酶的两个无活性片段（N端片段和C端片段）组合而成为功能完整的酶的过程。这种lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的B•半乳糖昔酶阴性突变体之间实现互补的现象叫a•互补。6、同工酶生物体内催化相同反应而分子结构不同的酶同裂酶：指来源不同但识别相同的核营酸靶系列，切割位点相冋，切割后形成相同的粘性末端的限制性内切酶。同尾酶：来源不同，识别的靶系列也各不相同，但切割后产生相同的粘性末端的限制酶。7、质粒质粒（Plasmid）是细菌菌体内的

4、一种环状DNA分子，是一种染色体外的稳定遗传因子，它可以独立于细菌的染色体DNA而复制。8、基因工程在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构建遗传物质的新组合，并使之渗入到原先没有这类分子的寄生细胞内，而能持续稳定地繁殖。基因工程：又叫基因操作或重组DNA技术，在体外对不同生物的遗传物质（基因）进行剪切、重组、连接，然后插入到载体分子中（细菌质粒、病毒或噬菌体DNA）,转入微生物、植物或动物细胞内进行无性繁殖，并表达出慕因产物。或：克隆编码特定性状的基因，通过生物、物理和化学等方法，导入到受体生物细

5、胞，然后通过组织培养培育出转基因个体的整个过程。9、克隆Clone（名词）：是指从一个共同祖先无性繁殖下来的一群遗传上同一的DNA分子细胞或个体所组成的特殊的生命群体。Clone（动词）:产生一个遗传上同一的DNA分子细胞或个体所组成的特殊的生命群体的过程。10、DNA克隆将某一特定DNA片段通过重组DNA技术插入到一个载体(如质粒和病毒等)屮，然后在宿主细胞中进行白我复制所得到的大量完全相同的该DNA片段的“群体”。简答题1、TA克隆原理及影响因素。TA克隆原理：TA克隆系统由Invitrogen公司(S

6、anDiego,CA)发展而來的商业性试剂盒,它用于PCR产物的克隆和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR产物的3'末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3'T突出端的载体，在连接酶作用下，可以快速地、一步到位地把PCR产物直接插入到质粒载体的多克隆位点(MCS)中。怎样提高pMD18-TVector的克隆效率？1.纯化PCR产物。切胶回收的PCR片段最好2.除去残存的引物等杂质。3.DNA片段的立体结构、DNA片段的长短都会影响克隆效率。一般情况下，大片段DNA的克隆效率(连接效率与转化效率)小

7、于短片段DNA,在使用人片段DNA的连接液进行转化吋，建议采用电转化方法。PCR产物难以插入载体，为什么？1.确认PCR反应使用的DNA聚合酶在PCR产物的3端是否附加了”A”。有些DNA聚合酶扩增的PCR产物是平端，如使用本公司的PyrobestDNA聚合酶(TaKaRaCode:DR005)等扩增得到的PCR产物不能直接用于TA克隆;PCR产物保存时间不要过长,长时间保存的PCR产物会脱去末端的”A”碱基。2.PCR产物中短片段杂质DNA太多，这时应切胶回收纯化DNA片段，回收时PCR产物不要在紫外线下

8、暴露时间过长。3.确认感受态细胞的转化效率，使用的感受态细胞的转化效率最好大于108cfu/mgpUC118DNAo4.确认LigationSolutionI的连接效率是否降低，多次反复冻融会降低的LigationSolutionI连接效率。5.确认抗生素的浓度是否过大。6.最好使用新配制的平板培养基(T载体技术是比较简便有效的，尤其对于一些多克隆位点的可选择内切酶种类稀少的表达载体该技术特别适用，该方法具有不需