sd大鼠抗青光眼滤过术后hsp47表达的动态观察

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1、SD大鼠抗青光眼滤过术后HSP47表达的动态观［通信作者：邸红莲］李颖邸红莲*保定市第一中心医院071000【摘要】目的探讨SD大鼠采用抗青光眼滤过术处理后热休克蛋白47(Heatshockprotein47，HSP47)在.滤过泡中的表达变化及其意义。方法选取健康成年SD大鼠24只，雌雄各半，均随机编号1〜12号，釆用随机数值表法分为2d、4d、6d、10d、14d、正常组6个组(4只每组)，2d、4d、6d、10d、14d组大鼠均进行右眼抗青光眼滤过手术处理，术后采用裂隙灯观察各组大鼠滤过泡及眼前节情况，分别与实验第2d、4d、6d、10d、14d处死相应组大鼠，应用实时荧光定量(P

2、CR)技术检测滤过泡中的HSP47、I、III型胶原蛋白的表达情况。结果SD大鼠在术后第2d的HSP47、I、III型胶原蛋白、mRNA在滤过泡中的表达就略微的上升，但与正常组比较差异不显著(P>0.05),术后第4d、6d、10d、14d大鼠滤过泡中的HSP47、III型胶原蛋白、mRNA表达水平较正常组显著地升高且差异只有统计学意义(P<0.05);I型胶原蛋白、mRNA在大鼠抗青光眼术后第6d、10d、14d较正常组显著的升高(P<0.05)o结论SD大鼠抗青光眼术后HSP47蛋白及mRNA的表达水平变化基木与I、III型胶原蛋白、mRNA表达变化一致，表明HSP

3、47在大鼠眼滤过泡瘢痕形成过程中可能具有重要作用。【关键词】抗青光眼滤过术；SD大鼠；热休克蛋白47;滤过泡【中图分类号】R775【文献标识码】A1材料与方法1.1实验动物及分组方法选取健康成年SD大鼠24只，雌雄各半，体质量250〜300g,平均(274±22)g；由某大学医学部动物实验中心提供(许可证号:SCKK(沪)2014009)；雌雄均随机编号1〜12号，采用随机数值表法分为2d、4d、6d、10d、14d、正常组6个组（4只每组）。饲养于室温为18〜25°C、湿度40%、黑暗与日光照射各12h的环境中，1.2实验方法1.2.1实验仪器与药品选用北京中杉金桥生物技

4、术有限公司生产的二步法免疫组化检测试剂盒、枸橼酸盐抗原修复液及浓缩型DAB试剂盒；选用北京协和医院病理科提供的伊红染液；选用卫生部中日友好医院病理科提供的0.1%苦味酸-天狼星红染。选用日本高木精工株式会社提供的，TAKAGIOM.10眼科手术显微镜；选用日本Nikon公司生产的E600W光学显微镜及数码成像系及偏振光显微镜及数码成像系统；选用日本SANYO公司生产的恒温培养。1.2.2造模方法给予人鼠腹腔注入35mg/kg2%戊巴比妥钠溶液麻醉，并给予人鼠0.5%盐酸地卡因滴眼麻醉，5-0尼龙线开睑，再次0.5%盐酸地卡因滴眼麻醉。于角膜后2.0cm处切U,横向切开球结膜、球筋膜、巩膜

5、，选用热大头针灼烧巩膜切除区域。扩大切口直至前房，剪除角巩膜缘处组织，平铺结膜瓣，缝合球结膜，常规抗炎，送冋饲养房，常规喂养。1.3指标检测方法（PCR法检测HSP47、I、III型mRNA及蛋白的表达）2%戊巴比妥钠麻醉处死大鼠，打开大鼠腹腔，暴露心脏，剪开左心耳，选用生理盐水快速灌注心脏，直至右心耳流出液清亮。摘除大鼠双侧眼球，福尔马林固定，包埋封闭，置入脱水机内脱水，石蜡包埋，切片，HE染色，光学显微镜下观察并照相记录。1.4统计学分析统计分析在SPSS17.0中进行。计量资料以（±s）表示，多组比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。P<0.0

6、5表示差异具冇统计学意义。2结果2.1SD大鼠造模眼的滤过泡形态及眼前节变化20只SD大鼠的造模过程顺利，抗青光眼滤过术后手术区球结膜弥散隆起(图1)，未发现渗漏、滤过泡的形成完好；造模大鼠的切口愈合良好，结膜透明，前房完好，所有手术眼术后均可见房水闪辉，2到3d消失，手术中有3只眼睛出现术中出血，术后2d完全吸收，术后大鼠的瞳孔圆形，晶状体透明，对光反射存在。2.2SD大鼠抗青光眼滤过术后HSP47、I、III型胶原在蛋白质水平上的表达变化SD大鼠在术后第2d的HSP47、I、III型胶原蛋白在滤过泡中的表达就略微的上升，但与正常组比较差异不显著(P>；0.05)，术后第4d、6d

7、、10d、14d大鼠滤过泡中的HSP47、III型胶原蛋白表达水平较正常组显著地升高且差异具奋统计学意义(P<0.05)；I型胶原蛋白在大鼠抗青光眼术后第6d、10d、14d较正常组显著的升高(P<0.05)o详见图1。2.3SD大鼠抗青光眼滤过术后HSP47、I、III型胶原在mRNA水平上的表达变化SD大鼠在术后第2d的HSP47、I、III型胶原mRNA在滤过泡中的表达就略微的上升，但与正常组比较差异不显著(P&g