医学毕业论文脊神经根性撕脱伤所致脊髓运动神经元中eta

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1、卜神经根性撕脱伤所致脊髓运动神经元中Eta姓名：2014年6月25日脊神经根性撕脱伤所致脊髓运动神经元中Eta作者：傅永慧，沈涛，付勤，吕刚，王海义【关键词】脊祌经根/损伤AlterationofEtalexpressioninspinalmotoneuronresultingfromspinalrootavulsion【Abstract】AIM:ToexplorethealterationofEtalexpressioninmotoneuronsfollowingspinalrootavulsionanditssignificance.METHODS:Animalmodelofsp

2、inalrootavulsionwasestablishedandimmunohistochemistryandinsituhybridizationwereemployedtoinvestigatewhetherspinalrootavulsionwillalterthelevelsofEtalexpressioninthespinalmotoneurons.RESULTS:AlowlevelofEtalwasfoundinasubsetofspinalmotoneuronsbeforeavulsionbut3dafteravulsion,thenumberofEta1expres

3、singmotoneuronsincreasedby52.5%，thoughthetotalnumberofmotoneuronsreducedby31.6%.CONCLUSION:Etalisunregulatedinspinalmotoneuronsafterspinalrootavulsionanditmayhavesomeprotectiveeffectonmotoneurons.【Keywords】Etal;spinalcord;spinalnerveroots/injuries【摘耍】目的：探讨脊神经根性撕脱伤后脊髓运动神经元中EtalmRNA表达的意义.方法：首先建立脊

4、神经根性撕脱伤的动物模型，采用原位杂交和免疫组织化学方法检测损伤前后EtalmRNA在脊髓运动祌经元屮表达的变化.结果：损伤前Etal在脊髓运动神经元中微量表达.损伤后3d，损伤侧脊髓运动神经元总数减少31.6%,但表达Etal的运动神经元数量增加52.5%.结论：脊神经根撕脱后Etal在脊髓运动神经元内上调表达可能是对神经元本身的一种保护.0引言Etal是一种磷酸化糖蛋0［1］,在中枢神经系统的炎症［2,3］及创伤愈合过程屮起到一定作用.然而，关于脊神经根性撕脱伤后EtalmRNA在脊髓运动神经元中表达的变化及意义尚无相关报道.我们建立脊神经根撕脱的动物模型，研究脊神经根撕脱是否可

5、以改变Etal在大鼠脊髓运动神经元中的表达水平.1材料和方法1.1材料雄性Wistai•鼠8wk龄，体质量200g，30只.用14g/L氟烷及1.5L/min02对动物行吸入麻醉，于骼嵴上方作左旁正中切口，长约2.5cm.沿中线剥离左侧最长肌，并用小剪刀剪除L5横突.将经过L5横突的L3,L4神经根与周围组织分开，用小钩将其轻轻提起，并用小血管钳将其从椎间孔拉出，逐层关闭切U,制成L3，L4神经根的椎管外撕脱模型.术后1,3，7,14或21d处死动物.如文献［4］所述方法，在戊巴比妥麻醉下，通过灌注泵用冷生理盐水及40g/L的低温多聚甲醛(溶于pH7.4的PBS中)对实验鼠进行心内灌

6、注.收集含有L3,L4脊髓的组织块，于固定液屮4"C过夜固定，然后低温保护于含200g/L蔗糖的PBS溶液中过夜.用恒温切片机(LeicaMicrosystems,Wetzlar,Germany)切取12

7、im的切片并放置于多聚赖氨酸包埋的载玻片上.1.2方法Nissl染色，利用甲酚紫对切片进行染色.原位杂交，依文献［5］所述进行体外转录.用BamHI或Xbal切割含有鼠ETAIcDNA序列(核苷酸从259到1025)的pCRlI质粒(Invitrogen),使之线性化.按照操作说明书，利用digoxigeninRNA标记物(Roche)及SP6,T7的RNA聚合酶(Takara)，

8、从线性化的质粒中进行正义、反义RNA探针的体外转录.用文献［6］所述方法的改良法进行原位杂交.以正义探针杂交组作为阴性对照.原位杂交反应后，PBS清洗切片5min,然后与一抗在4'C下反应过夜.一抗为单克隆小鼠抗NeuN抗体（1:400）.切片用PBS冲洗3次以上，每次10min.最后与Alexa荧光488共轭的羊抗小鼠IgG抗体反应并用焚光固定剂（DakoCytomation,Copenhagen）固定于载玻片上.如文献［5］所述进行免疫组化反应.一抗是