dppiv基因影响卵巢癌生物学行为的机制探讨

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1、DPPIV基因影响卵巢癌生物学行为的机制探讨王忠民1卢永科2(1大连妇产医院辽宁大连116033;2大连医科大学毒理学研究所辽宁大连116021)【中图分类号】R730.4【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)30-0009-02【摘要】目的探讨DPPIV基因高表达对卵巢癌细胞系恶性行为的影响及其机制。方法应用体外增殖能力、黏附和侵袭试验检验HO-8910PM、HOPcDNA和HODPPIV细胞恶性行为差异；利用流式细胞技术、吖啶橙染色、DNAladder、透射电镜以及Westernblot检测Fas/Bcl-2基因蛋白表达水

2、平，探讨HO-8910PM、HOPcDNA和HODPPIV细胞中凋亡状况。结果DPPIV基因高表达可显著抑制卵巢癌细胞的增殖、黏附和侵袭能力；同时HODPPIV细胞的凋亡率、Fas基因蛋白表达水平明显高于HOPcDNA和HO-8910PM细胞(P<0.05);HO-8910PM和HOPcDNA细胞的Bcl-2基因蛋白表达水平明显高于HODPPIV细胞(P8dt;0.05｝。结论DPPIV基因高表达可抑制卵巢癌细胞的恶性行为；凋亡可能是DPPIV基因发挥生物学作用机制之一。【关键词】DPPIV基因凋亡抑制卵巢癌卵巢肿瘤是女性牛.殖器常见的肿瘤

3、之一，其中恶性卵巢癌约占10%,居女性生殖器恶性肿瘤的第三位，而上皮性卵巢癌是妇产科恶性肿瘤中主要的死亡原因。70%患者在确诊时己近晚期。卵巢癌患者的5年生存率仍然很低。随着分子牛.物学和肿瘤基础研究的飞跃发展，使人们认识到肿瘤最终是一种基因病。基于此认识人们可以从分子和基因水平探索卵巢癌的病因和发病机制并寻找卵巢癌的诊断和治疗方法。人类DPPIV基因是分子量约llOkD的跨膜糖蛋白。随着研究的深入，发现DPPIV基因在肿瘤进展中起重要作用，我们此次探讨DPPIV基因抑制卵巢癌细胞系恶性行为的可能机制。1材料与方法1.1实验材料细胞系：HO-89

4、10PM卵巢癌细胞系是来自于人类卵巢浆液性乳头状囊腺癌，购于中科院典型培养物保藏委员会细胞库；将真核表达载体PCDAN3.1⑴和全长野生型DPPIV基因通过阳离子脂质体转染HO-8910PM卵巢癌细胞系，命名HODPPIV细胞高表达DPPIV基因。细胞均置于37°C,5%浓度C02孵育箱中培养。1.2试剂凋亡DNA梯形检测试剂盒(TACSApoptoticDNALadderingKit,Trevigen,Inc);兔抗人Bcl-2和Fas单克隆购于Sigma公司。1.3方法13.1流式细胞(FCM)法测定不同卵巢癌细胞系的凋亡率及细胞周期数据利用

5、Macintosh650计算机上的Modifit软件分析。细胞凋亡率=凋亡细胞数/总细胞数×100%。1.3.2吖啶橙染色观察细胞凋亡现象三种细胞分别取5×104个制备成单细胞悬液，使HO-8910PM、HOPcDNA和HODPPIV细胞爬行于玻片后，将配制好的吖啶橙溶液滴于盖玻片上，荧光显微镜观察，摄片。1.3.3DNALadder测定实验方注严格按TACSApoptoticDNALadderingKit操作说明进行。1.3.4透射电镜观察透射电镜标本制作参考文献［1］。1.3.5Westerblot检测Fas/Bcl-

6、2基因表达具体操作参考文献［2］。1.3.6不同卵巢癌细胞增殖具体参考文献［3］。1.3.7细胞体外粘附试验具体操作参考文献［3］。1.3.8体外细胞侵袭测定细胞侵袭性测定使用Matrigel侵袭小室，具体操作参考文献［4】。1.3.9体外细胞趋化能力测定方法步骤与体外侵袭力测定相同，只是侵袭小室的滤膜不用人工基质胶覆盖。1.4统计分析利用SPSS10.0统计软件包进行统计分析。2结果2.1不同细胞系的凋亡率及细胞周期HO-8910PM、HOPcDNA和HODPPIV细胞在细胞周期G1期前均出现亚二倍体凋亡峰。但是HODPPIV细胞的凋亡峰更明显

7、。HODPPIV细胞凋亡率显著高于HO-8910PM、HOPcDNA细胞(P<0.05)。2.2吖啶橙染色细胞凋亡形态当HODPPIV细胞发生凋亡时，形成典型的凋亡小体。HO-8910PM和HOPcDNA细胞未发生凋亡吋细胞核为均匀黄色或黄绿色荧光，核内RNA为红色，细胞质为桔红色或红色。2.3细胞凋亡的DNA梯形图HO-8910PM和HOPcDNA细胞未发生凋亡吋电泳后无梯形条带出现，HODPPIV细胞发生凋亡吋电泳后可出现明显的梯形条带。2.4透射电镜观察凋亡形态在透射电镜可见：当HODPPIV细胞发生凋亡吋，细胞体积变小，细胞浆浓缩，

8、线粒体轻度肿胀，细胞浆内见空泡增多；细胞膜保存完整，细胞膜表面微绒毛和伪足减少或消失；细胞膜出现出芽、出泡现象。细胞核浓缩和边集甚至发生