id-1在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

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1、Id-1在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义粪仁国1王晓毅2宣鸣2(1攀枝花学院附属医院口腔科四川攀枝花617000)(2四川大学华丙口腔医学院口腔颂面外科教研室四川成都610041)【中图分类号】R730.4【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)27-0090-03【摘要】木文通过探讨唾液腺腺样囊性癌中Id-1的表达水平及意义。得出结论：Id-1蛋白在唾液腺腺样囊性癌中表达增高，提示它可能在肿瘤的发生和发展中其有一定的作用。【关键词】Id-1蛋白腺样囊性癌免疫组织化学Id-1(inhibitorofdifferentiationorinhibit

2、orofDNAbinding-1)是一种螺旋-环-螺旋(HLH)蛋白，由于缺乏DNA结合域，因此，可通过负调控转录因子的活性抑制细胞分化，促进细胞增殖，从而参与肿瘤的发生、侵袭以及远处转移。腺样囊性癌(ACC),是最常见的唾液腺恶性肿瘤之一，浸润性极强，易局部复发；易沿祌经扩散；易血行性转移，转移率高达40%。木实验采用免疫组织化学方法研究Id-1在ACC中的表达水平，并分析其与临床病理指标之间的关系，以探讨Id-1在ACC发生发展中的作用及意义。1材料与方法1.1组织标木收集四川大学华西口腔医院1998-2003年间SACC石蜡标本45例，男20例，女25例；年

3、龄27-70岁，中位年龄47岁。10例正常唾液腺组织，其中腮腺6例，来自经组织病理学证实无颈部淋巴转移的颈清扫腮腺下极，并经病理证实为正常的腮腺组织；舌下腺4例，取自舌下腺囊肿患者的舌下腺，经病理证实为正常舌下腺。1.2试剂兔抗多克隆抗人Id-1抗体购自美国SantaCruz公司，工作浓度为1:100;链酶菌抗生物素蛋白一过氧化物酶复合物(S-P)试剂盒：购自北京中杉金桥生物技术有限公司。1.3实验方法采用免疫组织化学S-P法，主要步骤如下：石蜡包埋组织切片常规脱蜡水化后，蒸馏水漂洗5min。3%的H2O2室温下孵育30min以阻断内源性过氧化物酶活性；沸水中枸橼

4、酸缓冲液预热后，热修复组织抗原20min;自然冷却，蒸馏水冲洗3次，每次5min;滴加一抗(Id-1抗体)，4°C冰箱中过夜；恢复室温，PBS冲洗3次，每次5min;滴加二抗，37°C烘箱孵育30min,PBS冲洗3次，每次5min;加新鲜配制的DAB溶液显色；自来水冲洗，苏木精复染，中性树脂封固。以PBS代替一抗作为阴性对照，以确诊食管癌标本为阳性对照。1.4结果判定光镜下随机观察5个400倍视野，以细胞浆呈棕黄色或棕色为阳性，计数不少于500个细胞中进行细胞计数及评分，根据染色程度及染色细胞百分率进行分析评分。参照Schindl和Neufeld等的方法记分：A

5、项:按有无着色及着色强度(以多数阳性细胞呈现的染色为准)计分:不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;B项:按阳性细胞百分率，1%〜10%为1分，11%〜50%为2分，>51%为3分。计算每张切片的染色积分=A×B,以得分0〜2分为阴性(-),3〜4分为弱阳性(+)，5〜7分为中度阳性(++),8〜9分为强阳性(+++)表达。染色结果判定由两名病理科医师盲法独立阅片完成，同吋，通过HE染色切片观察，证实所有标本为腺样囊性癌或正常腺体组织。1.5统计学处理应用SPSS13.0软件进行统计学分析。对各组Id-1阳性表达率进行x2检验，

6、检验水准为α=0.05。2结果2.1Id-1蛋白在正常唾液腺及ACC中的表达Id-1蛋白免疫组化染色阳性产物呈棕黄色或棕色，主要分布于细胞浆内。ACC中Id-1表达高于正常唾液腺，两者之间差异具有统计学意义。(图1〜2,表1)02.2Id-1蛋白表达与临床病理指标的关系本研究中Id-1的表达与病理类型、性别、年龄无关，而与临床分期及转移有关(表2)。3讨论研究表明，很多与细胞生长、组织特异性分化有关的转录因子都属于碱性螺旋-环-螺旋(basichelix-loop-helix,bHLH)蛋白，Id蛋白属于螺旋一环一螺旋(HLH)蛋白质超家族，相对分子量

7、13〜20kDa,是bHLH转录因子主要的抑制因子。Id蛋白由RobertBenezra等在1990年首先发现。哺乳动物中的Id蛋闩质家族有四个成员，Id-1〜4、bHLH蛋白二聚体的形成是DNA与“E盒”(CANNTG)或“N盒”(CACNAG)识别序列结合的必要条件。由于Id蛋白缺乏与DNA结合所必需的碱性区域，它主要通过与转录因子形成异源二聚体，干扰其与DNA的结合，阻断其对下游分子的转录激活作用，从而抑制细胞的正常分化，促进细胞增殖。此外，Id基因具奋癌基因的特性，其编码的Id蛋白具有促进细胞增殖及参与肿瘤发生与发展的作用，其在许多肿瘤细胞中呈现高表达。I

8、d主要分布