fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因及其启动子高转录活性的分子机制研究

《fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因及其启动子高转录活性的分子机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、Fra-1在乳腺癌细胞中高表达原因及其启动子高转录活性的分子机制研究周秋媛李虹王红莉奎违徐艳坐湖北姗医鵬理科摘要：目的探讨Fra-l在乳腺癌细胞屮高表达原因，以及Fra-1启动子高转泶活性的分子机制。方法选取2株人乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7、1株人脐静脉内皮细胞株ECV304进行研宄。采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法和蛋白质印迹法分别检测Fra-lmRNA和蛋白的表达情况;构建Fra-1双荧光报告载体，检测Fra-1启动子转录活性;构建Fra-1启动子短截报告载体及相关位点的突变型报告载体，检测短截报告载体及突变型载体转录活性;通过凝胶迁移阻滞试验观察生

2、物素标记的特异性探针与活化因子蛋白-1（API）结合情况。结果乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7中，Fra_l的mRNA和蛋白的相对表达量及其启动子全长报告载体转录活性均高于人脐静脉内皮细胞株ECV304,差异有统计学意义（P〈0.05）:在构建的一系列Fra-1启动子短截报告载体中，只有pGL3B_256活性明显下降，差异有统计学意义（P〈0.05）:API突变型报告载体pGL3B-M2、特异性蛋白1及API双突变报告载体PGL3B-M3活性明显低于野生型报告载体PGL3B-M1,差异有统计学意义（P<0.05）:凝胶迁移阻滞试验观察到生物素标记的特异性探针与API

3、结合发生了明显的阻滞效应。结论在体外培养的乳腺癌细胞株MDA231和MCF-7中，反式作用因子API通过激活Fra-1基因启动子上调其表达。关键词：启动子;乳腺癌;反式作用因子;作者简介：周秋媛，女，主治医师，主要从事肿瘤病理研究。作者简介：李虹，E-mail:1845752066@qq.com。收稿日期：2017-03-12CausesofFra-1highexpressioninbreastcancercellsandmolecularmechanismofFra~lhightranscriptionactivityZHOUQiuyuanLIHongWANGHong

4、liLIWeiXUYanhuaDepartmentofPathology,CentralHospitalofEnshiAutonomousPrefecture;Abstract：ObjectiveToexplorethecausesofFra-1highexpressioninbreastcancercellsandmolecularmechanismofFra-1hightranscriptionactivity.MethodsTwohumanbreastcancercelllinesMDA231andMCF-7and1humanumbilicalveinendoth

5、elialcellECV304wereselectedastheresearchobjects.Realtimefluorescentquantitativereversetranscription-polymerasechainreactionandWesternblottingwereusedtodetecttheFra-1mRNAandproteinexpression;theFra-1dualfluorescencereportervectorwasconstructed,andtheFra-1promotortranscriptionactivitywasde

6、tected;theFra-1promotorshort-cutreportervectorandmutationreportervectoratrelatedlociwereconstructed,andthetranscriptionactivityofshort-cutreportervectorandmutationreportervectorwasdetected;thebindingsituationofspecificprobemarkedbybiotinwithactivatorprotein-1(API)wasobservedbyusingthegel

7、migrationblocktest.ResultsTherelativeexpressionofmRNAandproteinandpromotorwholelengthreportervectortranscriptionactivityofEra-1inhumanbreastcancercelllinesMDA231andMCF-7cellswerehigherthanthatinhumanumbilicalveinendothelialcellMCV304,thedifferencewasstatisticallysignifica