原癌基因fra-1高表达与乳腺癌细胞转移表型的关系

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1、原癌基因Fra-1高表达与乳腺癌细胞转移表型的关系作者：宋玉华，宋三泰，江泽飞，钱露，陈立勇，郭宁【摘要】目的研究原癌基因Fra-1与人乳腺癌细胞系MCF-7细胞侵袭及迁移的关系。方法提取乳腺癌细胞系MDA231细胞的总RNA，通过RT-PCR扩增Fra-1全长基因，将其克隆入pcDNA3.1(-)myc-his表达载体；应用脂质体法转染MCF-7细胞，观察Fra-1过表达对MCF-7细胞增殖、黏附和迁移的影响。结果高表达Fra-1增强了MCF-7细胞的增殖、黏附和迁移的能力。结论原癌基因Fra-1可能通过促进肿瘤细胞的增殖、黏附和迁移，在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中发

2、挥作用。【关键词】乳腺癌；Fra-1；AP-1；肿瘤转移；重组质粒；转染　　ABSTRACT:ObjectiveToillustratetheassociationofFra-1overexpressionwithmotilityandinvasivenessofbreastcancercells.MethodsFra-1genewasobtainedbyRT-PCR.PCRproductswereclonedintotheplasmidpcDNA3.1(-)myc-histocreatetherecombinantplasmidpcDNA3.1(-)myc-his/

3、Fra-1.TheplasmidwasthentransfectedintohumanbreastcancercelllineMCF-7.Theproliferation,adhesionandmigrationofMCF-7cellsstablyoverexpressingFra-1wereinvestigated.ResultsThe15enhancedgrowth,adhesionandmigrationofMCF-7cellsoverexpressingFra-1wereobserved.ConclusionInvasivenessandmetastasiso

4、ftumorcellscouldbepromotedbyFra-1mediatedenhancementofadhesionandmigrationoftumorcells.　　KEYWORDS:breastcancer;Fra-1;AP-1;metastasis;recombinantplasmid;transfection激活蛋白-1(activatorprotein-1,AP-1)是人类细胞中一种重要的核转录因子。AP-1信号通路的活化与细胞的癌变、增殖分化、凋亡等多种生物学效应有关，尤其在肿瘤细胞的运动迁移、细胞外基质的降解、肿瘤细胞的异常黏附以及转移灶新生血

5、管生长等多个侵袭转移的环节中发挥重要的作用［1］。哺乳动物细胞中AP-1主要由Jun、Fos亚家族组成［2］。15Fra-1为Fos家族中的一员，由于Fra-1没有转录激活区，早期的研究推测Fra-1可能参与AP-1的负向调控［3］。但是，近年来的研究显示，Fra-1具有转录激活能力及转化活性。有学者报道，Fra-1在鼠的成纤维细胞中过表达可导致裸鼠体内肿瘤形成［4］；诱导Fra-1表达可导致逆转录病毒转化的小鼠甲状腺细胞在体内成瘤［5］；在多种上皮性肿瘤，如甲状腺癌、头颈鳞状上皮癌等肿瘤中均可检测到Fra-1的高表达［6-7］。最近的研究发现，Fra-1与乳腺癌细胞

6、系增强的侵袭能力相关，在过表达Fra-1的MCF-7细胞中，基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)以及细胞周期素D1(cyclinD1)的表达上调，提示Fra-1可能影响肿瘤细胞的增殖、侵袭及血管形成［8］。本研究构建了人原癌基因Fra-1的真核表达载体,在人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中获得稳定表达，观察了Fra-1过表达对乳腺癌细胞增殖、黏附和迁移的影响。　　1材料与方法　　1.1材料　　乳腺癌细胞系MCF-7、MDA231及大肠杆菌JM109均为本室常规保存；DMEM培养基购自Gibco公司；Lipofec

7、tamineTM、TRIZOL和pcDNA3.1(-)/Myc-His为Invitrogen公司产品；限制性内切酶均购自NewEnglandBiolabs公司；Matrigel购自BDBiosciences生物公司；逆转录酶和T4DNA连接酶购自Promega公司；PyrobestDNA聚合酶、DNA分子量标准DL2000和DNA片段回收试剂盒为TaKaRa公司产品；质粒提取试剂盒购自博大泰克公司；引物合成及测序由英俊生物有限公司完成；抗Fra-1、抗myc鼠单克隆抗体为SantaCruz公司产品；抗GAPDH鼠单克隆抗体购自上海康成公司；辣根过氧化