abo与rh-(d)-血型鉴定操作规程(盐水法)

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1、ABO和Rh(D)血型鉴定操作规程(盐水法)一•目的规范ABO/Rh(D)血型鉴定的操作流程；保证临床用血的安全性及有效性。二.职责血库技术人员负责ABO和Rh(D)血型鉴定三.适用范围适用于血库ABO和Rh(D)血型鉴定血标本四.所需材料和设备1.材料抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、0型反定型试剂红细胞、生理盐水、小试管、滴管、患者血标本。2.设备荇通离心机、显微镜、血型血清学专用离心机。五.操作步骤1.将标本2000r/分钟离心2分钟，使标本血浆/血清与红细胞分离，并吸取红细胞配制3%悬液。2.取小试管3支，分别标明-A、抗H3、抗-D，用滴管分别加抗-A、抗-B、抗-D试

2、剂各2滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者3%红细胞悬液1滴，混匀。3.另取小试管3支，分别标明A、B、0细胞，用滴管分别加入受检者血淸2滴于试管底部，再分别以滴管加入3%A、B、0型试剂红细胞悬液1滴，混匀。1.以lOOOr/分钟离心1分钟。2.将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象，如肉眼不见凝集，应将反应物倒在玻片上，再以显微镜检查。3.ABO血型结果判定（见下表）：ABO血型结果判断分型试剂+受检者红细胞（正定型）受检者血清+试剂红细胞（反定型）抗-A抗-BA细胞B细胞0细胞血型+——+—A—++—B——++—0++———AB注：“+”凝

3、集；“一”不凝集4.Rh（D）血型判定：红细胞与抗-D试剂凝集为Rh（D）阳性无凝集力Rh阴性。5.凝集强度判断标准：4+红细胞凝集成一火块，背景清晰透明；3+红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞；1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；士镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围右许多游离红细胞;混合外观凝集（MixedField,MF）是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-（阴性）镜下未见凝集，红细胞均匀分布。二.注意事项1.单克隆抗体试剂和试剂细胞（除谱细胞外）每次使用前必须与相对应的红细胞和血清做阳性、阴性对照，以

4、检测其活性。2.观察结果时既要看有无凝集或溶血现象，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或Cis（顺式）AB的发现。3.人红细胞ABO血型检验结果是根据红细胞的抗原和血清/血浆中的抗体反应结果所决定，因此正反定型的结果应该一致。正反定型起到一个互相验证和质控的作用。只有正反定型结果相符才能正确判定ABO血型。4.反定型对ABO亚型的发现特别有帮助。原因是亚型患者细胞上A或B抗原很弱，通过正反定型易于发现二者结果不一致，从而引起警惕。5.如果正反定型不一致，则需进一步鉴定。可在止定型试验中增加抗-A1、抗-AB及抗-11;反定型试验中增加A2、0及自身细胞。正定型试验中的抗-A

5、B是用来确认弱A和弱B抗原，抗-A1用来鉴定A亚型，抗-H用于鉴定亚型及孟买型；反定型试验中的A2细胞用于鉴定A2亚型,0型细胞用于鉴定是否存在ABO系统以外的同种抗体影响型，自身对照用于鉴定是否存在自身抗体影响定型。如果是0型细胞或自身对照为阳性，则定型结果不可靠，必须进一步进行血型鉴定。1.ABO正反定型不一致的原因：(1)新生儿尚未形成ABO同种抗体，所以三个月内的新生儿只要求做正定型确定ABO血型。(2)漏加试剂，试剂污染或失效、血标本和试剂搞错等，均可造成假阴性、假阳性结果。(3)器材不洁可产生假阳性结果。(4)分型血清效价太低，亲和力不强等均可使凝集反应强度减弱，易误定

6、血型。(5)红细胞悬液过浓或过淡，导致抗原抗体比例不适当，出现前带或后带现象，易误判为假阴性。(6)受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于白血病或某些恶性肿瘤)以及类B或CisAB等，均可使凝集反应强度减弱。(7)受检者血清蛋白紊乱(如巨球蛋白血症)或实验温度过高，常引起细胞呈缗线状排列。(8)受检者血清中缺乏应有的抗-A或抗-B，如丙种球蛋白缺乏症，可引起正、反定型不符。(9)各种原因引起的红细胞溶血，误判为不凝集；部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体，或者患者血清中血型物质过多，中和了相应抗体，可导致假阴性结果。(1)由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集

7、往往是正反定型不符的原因。近期曾输过异型血，使患者血液标木成为不同型别的红细胞混合物，定型时显示“混合外观凝聚”现象。(2)嵌合体血型体内有两群红细胞，定型时显示“混合外观凝集”现象。(3)获得性类B由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。(4)药物等因素药物、右旋糖及静脉注射某些造影剂聚集而类似凝集。(5)血清中右意外抗体，如自身抗-1，常干扰定型。(6)老年人血淸中抗体水平大幅度卞降，影响反定型结果。1.如果无法找到正反定型不一致的原因，患者又需要紧急