罗布麻叶总黄酮的测定方法探讨

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1、罗布麻叶总黄酮的测定方法探讨刘东平，周亚球，王先荣【关键词】金丝桃苷；,,总黄酮；,,比色法；,,含量测定　　摘要：目的建立罗布麻叶ApocynumveumL.总黄酮含量测定的适用方法。方法以金丝桃苷作为对照品采用不同的含量测定方法测定罗布麻叶中总黄酮含量。结果以金丝桃苷为对照品紫外分光光度法测定的结果最高（4.21%），以金丝桃苷为对照品三氯化铝显色法测定的结果次之（3.81%），而以金丝桃苷作为对照品亚硝酸钠硝酸铝-氢氧化钠络合比色法测定的结果最低（3.31%）。结论以金丝桃苷为对照品，在酸性（加入醋酸-醋酸钠缓冲液）条件下加入三氯化铝显色法后的测定方法为罗布麻叶总黄酮

2、含量测定的适用方法。　　关键词：金丝桃苷；总黄酮；比色法；含量测定　　罗布麻叶为夹竹桃科植物罗布麻ApocynumveumL.的干燥叶，它是我国广泛应用的传统中药之一，在我国西北、华北及安徽的北部等很多地区均有其广泛资源。罗布麻植物有两个属三个种〔1〕：红麻属有罗布麻叶（ApocynumveumL.收载于2000年版《中国药典》为正品罗布麻叶）包括新疆小花罗布麻，白麻属有大花罗布麻叶Poacynumhendersonni(Hook.f.)pictum(Schrenk)Baill。大量的药理实验证明，总黄酮是罗布麻叶中主要的有效部位之一，文献报道其总黄酮主要含有芦丁、金丝桃苷

3、、异槲皮苷、三叶豆苷、黄芪豆苷、槲皮素、山奈酚等。新疆小花罗布麻中芦丁含量较高，而内地产的正品罗布麻叶、大花罗布麻叶、紫斑罗布麻叶中芦丁含量很少〔2，3〕。不同的含量测定方法测定罗布麻叶中总黄酮的含量不完全相同，而且有很大的差异。本文选择较有代表性的天津罗布麻叶，采用不同测定方法对其中总黄酮的含量进行测定和比较。　　1仪器与试剂　　6010型紫外可见分光光度计（安捷伦），BT25S型电子分析天平（德国赛多利斯）。罗布麻叶ApocynumveumL.购于安徽亳州永刚中药饮片厂有限公司，经安徽中医学院生药教研室王德群教授鉴定为产于天津的正品罗布麻叶。金丝桃苷对照品（购自中国药品

4、生物制品检定所批号：1521200202），其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1以金丝桃苷为对照品紫外分光光度法测定〔4〕　　2.1.1样品溶液与对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的天津罗布麻叶粗粉1.0g，置索氏提取器中，加入100ml甲醇提取5h，蒸干甲醇后，再用甲醇溶解并定容于50ml，过滤，续滤液则为样品溶液。另精密称取105℃减压干燥至恒重的金丝桃苷对照品3.993mg，置于50ml容量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。　　2.1.2检测波长的选择精密吸取对照品溶液1.0ml，样品溶液1.0ml分别置于25ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇

5、匀，以乙醇为空白对照溶液，在190~400nm范围内扫描吸收曲线，样品与对照品的吸收曲线基本一致，它们在258nm处有共同的最大吸收峰处有共同的最大吸收峰（见图1），因此我们采用258nm作为测定波长。　　2.1.3标准曲线的建立精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0与5.0ml分别置于25ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，以乙醇为空白对照溶液，照分光光度法（《中国药典》2005版Ⅰ部VB），在258nm处测定吸收度，以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线。算得回归方程为A=5.1059C-0.0085（r=0.999），在3.19~15.97μg/ml

6、的浓度范围内线形关系良好。　　2.1.4精密度实验取1.0ml对照品溶液置25容量瓶中，加乙醇定容至刻度，在258nm处重复测定6次，得出其吸收值，算得RSD=0.9%。　　2.1.5重复性实验称取天津产同批罗布麻叶药材粗粉6份，按样品溶液的制备方法制备样品，精密吸取1.0ml置于25ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，测定吸收值，算得RSD=0.77%。　　2.1.6稳定性实验精密吸取同一份样品溶液，在1，2，3，4，5，6h时分别测定吸收度，算得RSD=0.59%，结果表明样品溶液在6h内基本稳定。　　2.1.7回收率实验称取6份重现性试验用药材粗粉（总黄酮含量3.42%

7、）适量，分别加入金丝桃苷对照品适量，同法提取、测定，计算得平均回收率为98.99%，RSD为1.97%。　　2.2金丝桃苷作为对照品亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠络合比色法〔5〕　　2.2.1样品溶液与对照品溶液的制备样品溶液的制备同2.1.1，另精密称取105℃减压干燥至恒重的金丝桃苷对照品11.107mg，置于50ml容量瓶中，加乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。　　2.2.2检测波长的选择精密吸取对照品溶液、样品溶液各3.0ml分别置于25ml容量瓶中，加水至5.0ml，显色：加5%NaNO2溶液1.0