微生物的实验室培养》课件(选修1)

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1、微生物的实验室培养第二课时——纯化大肠杆菌1微生物实验室培养（知识点总结）2复习题1、甲、乙、丙是三种微生物，下表①、②、③是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在③中正常生长繁殖；甲能在①中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在②中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是：粉状硫10gK2HPO44gFeSO40.5g蔗糖10g（NH）2SO40.4gH2O100mLMgSO49.25gCaCI20.5g①++++-+++②+++-++++③++++++++A、甲乙丙都是异养微生物B、甲乙都是自养微生物

2、、丙是异养微生物C、甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物D、甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物3复习题2、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是：①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A、⑤③②①④⑥B、①②③④⑤⑥C、⑥②③④①⑤D、③④②①⑥⑤4三、纯化大肠杆菌实验目的：接种大肠杆菌于培养基上，经过培养使其形成由单个细胞繁殖形成的子细胞群体，即菌落。实验过程：(知识网络）配制培养基接种大肠杆菌恒温培养箱中培养（12—

3、24h）结果分析与评价计算→称量→溶化→灭菌→倒平板调PH→分装→包扎菌种保藏平板划线稀释涂布平板未接种的培养（对照组）接种的培养（实验组）培养基配制成功与否？接种操作成功与否？5配制培养基①在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；②右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；③左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。倒平板过程总结：6Q1.培养基高压蒸汽灭菌后，需冷却到____℃左右时，才能倒平板。用什么办法来估计培养基的温度？______________

4、_______________________________________________Q2.操作时锥形瓶口通过酒精灯火焰的目的是：_____________________________________________Q3.将平板倒置的目的是：_________________________________________________________________________________________________________________________Q4.在倒平板过程中，

5、将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？_____________________________________________________________50感觉锥形瓶的温度刚刚不烫手，就可以倒平板了防止瓶口微生物污染培养基既可以使培养基表面冷凝的水分更好的挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染不能，因为空气中的微生物可能在皿盖和皿底之间的培养基上滋生。配制培养基7平板划线接种原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面

6、。8平板划线接种灼烧接种环冷却划线（第一区域）蘸取菌液灼烧接种环冷却划线（第二区域）灼烧接种环冷却划线（第三区域）灼烧接种环冷却划线（第四区域）灼烧接种环冷却划线（第五区域）灼烧接种环平板倒置放置培养9平板划线接种第一区域第二区域第三区域第四区域第五区域10Q2：每次划线前灼烧接种环的目的：Q3：划线结束后灼烧接种环的目的：平板划线接种答案：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基答案：杀死上次划线结束后残留的菌种答案：及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和操作者。Q1：第一步灼烧接种环的目的：11稀释涂布平板

7、接种原理：将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。121、梯度稀释2、涂布平板稀释涂布平板接种13结果分析与评价1、培养基制备成功的标准2、接种操作成功的标准如果未接种的培养基在恒温箱中保温1~2天后无菌落生长，说明培养基配制是成功的，否则实验失败，需重新配制。如果培养基上生长的菌落颜色、性状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明操作是符合要求的。如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求

8、，实验失败，需分析原因，再次实验。14菌种的保藏（了解）1、临时保藏：适用于频繁使用的菌种。将菌种接种到固体斜面培养基，在适宜的温度下培养。当菌落长成后，将试管置于4℃的冰箱中保藏2、甘油冷冻管保藏：适用于需长期保存的菌种。在3mL甘油瓶中，装入1mL甘油灭菌。将1mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀，放-20℃的冷冻箱中保藏15纯化大肠杆菌（实验过程）16