基因工程的原理和技术

《基因工程的原理和技术》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第二节基因工程的原理和技术温故而知新限制性核酸内切酶DNA连接酶质粒——载体基因工程操作的工具剪切拼接导入表达（一）获得目的基因（二）形成重组DNA分子（三）将重组DNA分子导入受体细胞（四）目的基因的检测和表达基因工程的原理和技术1、筛选含有目的基因的受体细胞2、目的基因的表达步骤一获得目的基因人工合成(反转录法)利用PCR技术扩增已知序列：从基因文库获得未知序列：(DNAlibrary)聚合酶链式反应(PolymeraseChainReaction)氢键断裂，形成单链DNA。引物与DNA模板结合，形成局部双链

2、。在酶的作用下，不断延伸，合成双链DNA。多次循环，获得大量双链DNA分子。PCR技术扩增利用PCR技术扩增目的基因目的基因的mRNA逆转录单链DNA合成双链DNA（目的基因）蛋白质氨基酸序列推测mRNA的核苷酸序列推测结构基因的核苷酸序列化学合成目的基因人工合成法逆转录法根据已知氨基酸序列直接合成DNA鸟枪法：散弹射击法供体细胞DNA限制酶许多DNA片段载入运载体导入受体细胞扩增产生特定性状分离目的基因从基因文库获得步骤二形成重组DNA分子可能存在情况：目的基因载体步骤三将重组DNA分子导入受体细胞1、将目的基

3、因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法(三)将目的基因导入受体细胞1.基因工程中常用的受体细胞有哪些？2.导入过程如何？大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径受体细胞：细菌CaCl2细胞壁的通透性增大重组质粒进入受体细胞目的基因随受体细胞的繁殖而复制步骤四筛选含有目的基因的受体利用标记基因来筛选：通过检测标记基因的有无，（或利用标记基因体现的性状）来判断目的基因是否导入受体细胞。对目的基因进行分子水平的检测：通过合成标准探针，利用DNA杂交技术来进行目的基因的检测。DNA与DN

4、A杂交，DNA与RNA杂家步骤五目的基因的表达1、通过鉴定目的基因的产物蛋白来确定目的基因的表达。抗原与抗体杂交2、目的基因导入受体细胞后，受体细胞（或受体细胞发育来的生物体）会表现特定的性状，通过性状的观察来确定目的基因的表达。引入病原体目的基因的检测与鉴定——检查是否成功检测—鉴定——①检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因②检测目的基因是否转录出了mRNA③检测目的基因是否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等方法——方法——方法——DNA与DNA分子杂交DNA与RNA分子杂交抗原抗体杂交